Notch信號通路在慢性胰腺炎誘導胰腺癌發(fā)生過程中的作用機制.pdf

1、背景及目的:
　　 胰腺癌是惡性程度最高的消化系統(tǒng)腫瘤之一，由于其早期診斷困難、進展快、預后差在腫瘤致死的病因中高居第四位。因此揭示胰腺癌的發(fā)生發(fā)展機制，以期早期預防和早期治療具有重要意義。PK小鼠模型是第一個能準確復制人類從PanIN進展為PDAC全過程的轉基因小鼠模型。研究發(fā)現(xiàn)，人類慢性胰腺炎患者患胰腺癌的風險增加16倍。在人胚胎發(fā)育過程中起重要作用的Notch信號通路在慢性胰腺炎及胰腺癌中都出現(xiàn)了再激活。慢性胰腺炎可明顯加

2、速表達K-RasG12V致癌基因小鼠的胰腺癌發(fā)展。然而慢性胰腺炎加速胰腺癌發(fā)展的具體機制尚不明確。因此，本實驗利用PK小鼠模型，旨在研究Notch信號通路在慢性胰腺炎誘導胰腺癌發(fā)生過程中的作用機制。
　　 方法:
　　 將LSL-KrasG12D小鼠與PDX1-Cre小鼠雜交，通過PCR檢測其雜交子代的基因型，從而獲得雜合陽性的LSL-KrasG12D; PDX1-Cre小鼠。將其分為3組，分別為溶劑液干預組，雨蛙肽誘導

3、慢性胰腺炎組，雨蛙肽合并Notch信號通路阻斷劑DBZ共同干預組。每組再分為兩個干預時間，即5天和12天。在藥物干預結束后的第二天處死小鼠并取材。胰腺組織分為3部分，其中一部分進行石蠟包埋，用于后續(xù)HE染色評估病變及免疫組化在蛋白水平檢測Notch信號通路的活性及細胞標記物的表達情況;一部分用于qRT-PCR在mRNA水平檢測Notch信號通路的活性;另一部分則用于western blotting在蛋白水平檢測Notch信號通路的活性。

4、
　　 結果:
　　 (1)LSL-KrasG12D小鼠與PDX1-Cre小鼠雜交后共獲得雜交子代近800只，其中雜合陽性的LSL-KrasG12D; PDX1-Cre小鼠約140只，其陽性率約為1/5。
　　 (2)藥物干預5天后，雨蛙肽干預組及雨蛙肽合并DBZ干預組小鼠都出現(xiàn)了慢性胰腺炎，前者病變從大體到鏡下病理均明顯重于后者，溶劑液干預組小鼠的胰腺組織正常。藥物干預12天后，雨蛙肽干預組及雨蛙肽合并DBZ干

5、預組小鼠胰腺大體均出現(xiàn)了明顯瘤變，鏡下前者PanINs及PDAC的浸潤程度重于后者。溶劑液干預組小鼠胰腺大體正常，出現(xiàn)了局灶性的PanIN1的病變。
　　 (3)雨蛙肽合并DBZ干預組的慢性炎癥細胞T淋巴細胞(CD3+)及巨噬細胞(F4/80+)的浸潤程度顯著低于雨蛙肽干預組，在慢性胰腺炎病變?yōu)橹鲿r，前者血清炎癥因子TNF-α及IL-6水平顯著低于后者。在給予DBZ藥物干預12天后，Notch信號通路的部分活性受到了抑制。qRT

6、-PCR結果顯示Notch4、 Dll4、Hes1、Hey1的表達顯著降低。Western blotting結果顯示Notch2、Notch4及Dll4的表達出現(xiàn)了顯著降低，Notch3和Jagged2的表達也出現(xiàn)了輕度的降低，Hes1的表達無明顯變化。免疫組化結果顯示Notch1、Notch4、Jagged1、Dll1、Dll4及Hes1的表達出現(xiàn)了顯著降低;此外，在給予DBZ干預5天后，Notch1、Notch2、Notch3、Ja

7、gged1及Hes1的表達也出現(xiàn)了顯著降低。
　　 (4)PanIN1A具有富含粘液的特征，其中可見殘余成熟腺泡細胞標記物糜蛋白酶、淀粉酶表達陽性的腺泡細胞，反映了由腺泡細胞向導管細胞轉化的過渡狀態(tài)。其對不成熟腺泡細胞標記物叢生蛋白及PDX1染色的陽性則反映了其不成熟腺泡細胞特征，PanINs及PDAC對CK19表達陽性，表明了PanINs及PDAC的導管細胞特性。此外，雨蛙肽干預12天組的PanINs上皮細胞Ki67陽性細胞百