肥大細胞與眼眶特發(fā)性炎性假瘤纖維化的實驗研究.pdf

1、第1部分肥大細胞與眼眶特發(fā)性炎性假瘤纖維化的相關(guān)性研究.材料與方法.1.標(biāo)本來源收集該院2000年9月至2002年6月經(jīng)住院手術(shù)病理確診為特發(fā)性眼眶炎性假瘤的53例患者的病理組織石蠟標(biāo)本,參照Henderson分類法,根據(jù)病理組織中淋巴細胞浸潤與纖維化的不同程度,將眼眶炎性假瘤分為3型,即彌漫性淋巴細胞浸潤型、混合型和纖維硬化型.其中,淋巴細胞浸潤型19例;纖維硬化型22例;混合型12例;以4例正常人眼眶組織標(biāo)本作為正常對照.所有患者均

2、無其他眼疾.2.方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SABC法對53例特發(fā)性眼眶炎性假瘤組織標(biāo)本及4例正常眼眶組織標(biāo)本進行肥大細胞特異性標(biāo)記物類胰蛋白酶單克隆抗體檢測,觀察肥大細胞浸潤數(shù)量、分布特點、與膠原纖維的關(guān)系以及與IOIP組織纖維化程度的相關(guān)性.結(jié)論:1.與正常組織標(biāo)本比較,IOIP組織標(biāo)本中肥大細胞浸潤的數(shù)量顯著增加;肥大細胞的分布特點提示肥大細胞參與了IOIP組織纖維化的病理過程.2.肥大細胞浸潤的數(shù)量與IOIP組織標(biāo)本中的纖維化程度

3、呈高度正相關(guān),肥大細胞可能對眼眶特發(fā)性炎性假瘤纖維化的發(fā)生、發(fā)展有重要的促進作用.第2部分體外培養(yǎng)小鼠骨髓源性肥大細胞與眼眶成纖維細胞共育的實驗研究.1.材料與方法.體外分離培養(yǎng)BALB/c小鼠骨髓源性肥大細胞BMMC和同源鼠眼眶成纖維細胞OFB,并進行純化和鑒定.將兩種細胞共育,共育分為2組:兩種細胞接觸共育組和非接觸共育組,對照分為2組:BMMC對照組和OFB對照組;應(yīng)用光鏡、電鏡、特殊染色、細胞生長計數(shù)及RT-PCR等方法觀察共育

4、前后兩種細胞的形態(tài)學(xué)變化、超微結(jié)構(gòu)改變、眼眶成纖維細胞的增殖情況以及4個目的基因(mSCF、C-kit、bFGF和ProcollagenI)在共育前后的表達差異情況.結(jié)論:1.肥大細胞對眼眶成纖維細胞的生存和增殖有顯著的促進作用,并使其功能活躍,這種作用主要是通過兩種細胞間的直接緊密接觸而實現(xiàn)的.表明肥大細胞與眼眶成纖維細胞之間的相互作用有其獨特的機制,詳細機制有待進一步研究.2.肥大細胞與眼眶成纖維細胞通過直接接觸共育能夠顯著上調(diào)SC

5、F、C-kit、bFGF和ProcollagenI的表達水平,提示這兩種細胞通過相互接觸作用刺激纖維化因子的表達增強而參與纖維化的進程.第3部分反義SCF抑制成纖維細胞增殖的實驗研究.1.材料與方法.構(gòu)建正義及反義SCF表達質(zhì)粒載體,分別轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細(3T3細胞);應(yīng)用光鏡、電鏡、特殊染色、細胞生長計數(shù)等方法觀察兩種細胞培養(yǎng)5天后實驗各組中BMMC和3T3的增殖情況;應(yīng)用雙抗體夾心ELISA方法在蛋白水平觀察實驗各組中4個目的因

6、子SCF、CD117(C-kit的蛋白產(chǎn)物)、bFGF和Collagenl(ProcollagenI的蛋白產(chǎn)物)的表達情況.實驗分為5組:正義SCF轉(zhuǎn)染共育組、反義SCF轉(zhuǎn)染共育組、未轉(zhuǎn)染共育組、BMMC對照組和3T3對照組.結(jié)論:1.在體外實驗中,反義SCF轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細胞后,可以有效抑制肥大細胞與成纖維細胞之間的相互促進增殖作用,兩種細胞的生存和增殖都顯著下降.2.在體外肥大細胞與成纖維細胞接觸共育體系中,反義SCF轉(zhuǎn)染小鼠成纖維