植物蛋白MAP30的制備及其體外抗病毒活性的實驗研究.pdf

1、近年來,在豐富的植物資源中挖掘新的抗病毒制劑已成為令人矚目的新領域,對苦瓜子抗HIV蛋白30(momordica anti-HIV protein of 30kDa,MAP30)的開發(fā)研究即是其研究內(nèi)容之一.該研究從苦瓜子中分離提純了MAP30,并對其體外抗HIV-1活性作了初步研究,同時還測定了其針對單純皰疹病毒(HSV)以及乙肝病毒(HBV)的抗病毒活性,以期為MAP30的進一步開發(fā)研究奠定基礎,也為中國抗HIV新藥研制提供一些思路

2、與啟示.該研究包括以下內(nèi)容:1.MAP30的分離純化:將苦瓜子去皮、粉碎,離心過濾,經(jīng)硫酸銨沉淀、透析后,進行離子交換層析及凝膠過濾層析純化.2.MAP30純度的鑒定:紫外分光光度儀測定其吸收峰及濃度;SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法鑒定分子量大小及純度;Western-blot法鑒定其抗原性.3.MAP30對超螺旋DNA的切割作用:以質(zhì)粒pUC18為底物,與不同濃度的MAP30反應,以瓊脂糖凝膠電泳觀察其對DNA的作用.

3、4.MAP30等藥物體外抗HIV-1的作用:以MT4為靶細胞,采用ELISA法測定MAP30以及臨床上常用的抗病毒藥物疊氮胸苷(AZT)、無環(huán)鳥苷(ACV)及干擾素-α(IFN-α)對細胞培養(yǎng)上清HIV-1 P24抗原的抑制作用,并觀察藥物對HIV-1致細胞病變效應的抑制效果.5.MAP30等藥物體外抗HSV的作用:以Vero為靶細胞,采用ELISA法及間接免疫熒光法測定MAP30、ACV、IFN-α及AZT等藥物對細胞培養(yǎng)上清HSV-

4、1、HSV-2囊膜糖蛋白抗原的抑制作用,并觀察藥物對HSV致細胞病變效應的抑制效果.6.MAP30等藥物體外抗HBV的作用:以2.2.15為靶細胞,采用ELISA法、DNA免疫印跡法(Southern-blot)及熒光定量PCR法,測定MAP30、IFN-α、ACV及AZT等藥物對細胞培養(yǎng)上清HBsAg、HBeAg及細胞內(nèi)外HBV DNA的抑制作用. 該研究從苦瓜子中分離純化了MAP30,并證實它是分子量為30kDa的均一的蛋白質(zhì),它不