植物蛋白MAP30的制備及其體外抗病毒活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、近年來(lái),在豐富的植物資源中挖掘新的抗病毒制劑已成為令人矚目的新領(lǐng)域,對(duì)苦瓜子抗HIV蛋白30(momordica anti-HIV protein of 30kDa,MAP30)的開(kāi)發(fā)研究即是其研究?jī)?nèi)容之一.該研究從苦瓜子中分離提純了MAP30,并對(duì)其體外抗HIV-1活性作了初步研究,同時(shí)還測(cè)定了其針對(duì)單純皰疹病毒(HSV)以及乙肝病毒(HBV)的抗病毒活性,以期為MAP30的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究奠定基礎(chǔ),也為中國(guó)抗HIV新藥研制提供一些思路

2、與啟示.該研究包括以下內(nèi)容:1.MAP30的分離純化:將苦瓜子去皮、粉碎,離心過(guò)濾,經(jīng)硫酸銨沉淀、透析后,進(jìn)行離子交換層析及凝膠過(guò)濾層析純化.2.MAP30純度的鑒定:紫外分光光度儀測(cè)定其吸收峰及濃度;SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法鑒定分子量大小及純度;Western-blot法鑒定其抗原性.3.MAP30對(duì)超螺旋DNA的切割作用:以質(zhì)粒pUC18為底物,與不同濃度的MAP30反應(yīng),以瓊脂糖凝膠電泳觀(guān)察其對(duì)DNA的作用.

3、4.MAP30等藥物體外抗HIV-1的作用:以MT4為靶細(xì)胞,采用ELISA法測(cè)定MAP30以及臨床上常用的抗病毒藥物疊氮胸苷(AZT)、無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(ACV)及干擾素-α(IFN-α)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清HIV-1 P24抗原的抑制作用,并觀(guān)察藥物對(duì)HIV-1致細(xì)胞病變效應(yīng)的抑制效果.5.MAP30等藥物體外抗HSV的作用:以Vero為靶細(xì)胞,采用ELISA法及間接免疫熒光法測(cè)定MAP30、ACV、IFN-α及AZT等藥物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清HSV-

4、1、HSV-2囊膜糖蛋白抗原的抑制作用,并觀(guān)察藥物對(duì)HSV致細(xì)胞病變效應(yīng)的抑制效果.6.MAP30等藥物體外抗HBV的作用:以2.2.15為靶細(xì)胞,采用ELISA法、DNA免疫印跡法(Southern-blot)及熒光定量PCR法,測(cè)定MAP30、IFN-α、ACV及AZT等藥物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清HBsAg、HBeAg及細(xì)胞內(nèi)外HBV DNA的抑制作用. 該研究從苦瓜子中分離純化了MAP30,并證實(shí)它是分子量為30kDa的均一的蛋白質(zhì),它不