單肺通氣相關(guān)性肺損傷的特點(diǎn)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及防治策略.pdf

1、第一部分實(shí)驗一：
　　 目的：建立兔單肺通氣實(shí)驗?zāi)Ｐ汀?br>　　 方法：健康日本大耳白兔 10 只，麻醉后仰臥位固定。右側(cè)股靜脈建立靜脈通道，右側(cè)股動脈置管監(jiān)測動脈血壓并采集動脈血標(biāo)本；行氣管切開并插入自制雙腔氣管導(dǎo)管實(shí)施機(jī)械通氣，呼吸機(jī)通氣參數(shù)為：FiO2 1.0，RR 40/min，VT 10 ml/kg。以聽診法仔細(xì)調(diào)整自制雙腔氣管導(dǎo)管位置，并采用氣泡試驗法檢測左側(cè)氣管膨大處的密閉效果。將動物調(diào)整為左側(cè)臥位后，鉗閉左側(cè)

2、管腔建立右肺單肺通氣模型，并以纖支鏡直接觀察左側(cè)肺葉呼吸運(yùn)動是否停止并萎陷。單肺通氣2h 后，松開左側(cè)管腔恢復(fù)雙肺通氣。在單肺通氣前、單肺通氣后30min和恢復(fù)雙肺通氣30min 三個時間點(diǎn)測血壓、心率、氣道壓和動脈血?dú)夥治觥?br>　　 結(jié)果：實(shí)驗中單肺通氣效果滿意，操作方便，血流動力學(xué)穩(wěn)定，各時點(diǎn)動脈血?dú)庾兓?guī)律與臨床一致。
　　 結(jié)論：采用自制雙腔氣管導(dǎo)管可以建立日本大耳白兔單肺通氣模型。此模型簡單方便，成功率高，適用于

3、研究單肺通氣相關(guān)的肺損傷和低氧血癥的病理生理機(jī)制及其防治策略。
　　 第一部分實(shí)驗二：
　　 目的：采用三種方法建立兔單肺通氣模型并比較其效果。
　　 方法：日本大耳白兔 30 只，隨機(jī)分為3組(即A、B、C組)各10個，分別采用自制雙腔氣管導(dǎo)管法、左支氣管結(jié)扎法和插管過深法。呼吸機(jī)通氣參數(shù)為：FiO2 1.0，RR40/min，VT 10 ml/kg。單肺通氣2h 后恢復(fù)雙肺通氣。記錄各組單肺通氣實(shí)施的一次成功

4、率、總成功率、從氣管切開開始到單肺通氣實(shí)施所需要的時間、動物失血量。
　　 結(jié)果：各組進(jìn)入實(shí)驗的動物數(shù)分別為10、6、8 只。與B、C組比較，A組一次成功率和總成功率高，所需時間明顯較少(P<0.01)，且出血量明顯少于B組(P<0.01)。
　　 結(jié)論：采用自制雙腔氣管導(dǎo)管能迅速有效的建立單肺通氣模型，優(yōu)于左支氣管結(jié)扎法和插管過深法，是用于研究與單肺通氣相關(guān)病理生理機(jī)制的理想模型。
　　 第二部分
　　

5、 目的：建立兔單肺通氣模型后，觀察兩側(cè)肺損傷的特點(diǎn)以及不同時間的影響，為后續(xù)的研究摸索條件。
　　 方法：健康日本大耳白兔24 只，隨機(jī)分為4組：對照組(C組，n ＝6)雙肺通氣2h ；
　　 右側(cè)單肺通氣組(O1組、O2組及O3組，n ＝6)單肺通氣時間分別為1h、2h、3h，隨后恢復(fù)雙肺通氣1h。在實(shí)驗結(jié)束前開胸，分別由兩側(cè)肺靜脈同時抽取肺靜脈血、由股動脈抽取動脈血做血?dú)夥治霾y定氧合指數(shù)；采用頸動脈快速放血處死動物

6、，將各組左右肺分開處理。檢測各組肺組織病理改變，并計算肺損傷評分；檢測各肺組織濕干重比值、MPO、MDA、SOD。
　　 結(jié)果：⑴ C組左右側(cè)肺、O1組右側(cè)肺組織結(jié)構(gòu)形態(tài)完整，肺泡內(nèi)無明顯滲出液，肺間質(zhì)無明顯水腫和炎癥；O1組左側(cè)肺、O2組右側(cè)肺和O3組右側(cè)肺肺泡內(nèi)可見滲出液，肺間質(zhì)增厚并可見炎性細(xì)胞浸潤；O2組左側(cè)肺、O3組左側(cè)肺肺泡內(nèi)可見滲出液，部分肺泡腔萎陷不張或充血，肺間質(zhì)增厚并可見大量炎性細(xì)胞浸潤。肺損傷評分：C組左右

7、側(cè)相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ﹥0.05)，另三組組內(nèi)左右側(cè)比較則左側(cè)明顯增高(P<0.01)；各組間右側(cè)比較表現(xiàn)為逐步升高，其中O3組右側(cè)與O1組右側(cè)相比較明顯增高(P<0.05)；各組間左側(cè)相比較亦表現(xiàn)為逐步升高，其中O2組左側(cè)、O3組左側(cè)與O1組左側(cè)相比較明顯增高(P<0.01)，O1組左側(cè)與C組左側(cè)相比較明顯增高(P<0.01)。⑵各組氧合指數(shù)比較，C組左右側(cè)相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ﹥0.05)，另三組組內(nèi)左右側(cè)比較則左側(cè)明

8、顯下降(P<0.01)；各組間右側(cè)比較表現(xiàn)為逐步降低，其中O3組右側(cè)與O1組右側(cè)相比較明顯降低(P<0.01)；各組間左側(cè)相比較亦表現(xiàn)為逐步降低，其中O2組左側(cè)、O3組左側(cè)與O1組左側(cè)相比較明顯下降(P<0.01)，O1組左側(cè)與C組左側(cè)相比較明顯降低(P<0.01)。動脈血?dú)馑鶞y得氧合指數(shù)表現(xiàn)為逐步降低，O2組、O3組與O1組相比較明顯下降(P<0.01)，O1組與C組相比較明顯降低(P<0.01)。
　　 ⑶各組濕/干重比、M

9、PO 活性和MDA的變化表現(xiàn)為C組組內(nèi)左右側(cè)相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ﹥0.05)，O1組、O2組和O3組組內(nèi)左右側(cè)比較則左側(cè)明顯增高(P<0.01)；各組間右側(cè)比較表現(xiàn)為逐步升高，其中O3組右側(cè)與O1組右側(cè)相比較明顯增高(P<0.01),O1組右側(cè)與C組右側(cè)相比較明顯增高(P<0.01)；各組間左側(cè)相比較亦表現(xiàn)為逐步升高，其中O2組左側(cè)、O3組左側(cè)與O1組左側(cè)相比較明顯增高(P<0.01)，O1組左側(cè)與C組左側(cè)相比較明顯增高(P<0

10、.01)。⑷各組SOD 值的變化表現(xiàn)為C組和O1組組內(nèi)左右側(cè)相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ﹥0.05)，O2組和O3組組內(nèi)左右側(cè)比較則左側(cè)明顯降低(P<0.01)；各組間右側(cè)比較表現(xiàn)為逐步降低，其中O3組右側(cè)與O1組右側(cè)相比較明顯降低(P<0.01)，O1組右側(cè)與C組右側(cè)相比較明顯降低(P<0.01)；各組間左側(cè)相比較表現(xiàn)為逐步降低，其中O2組左側(cè)、O3組左側(cè)與O1組左側(cè)相比較明顯降低(P<0.01)，O1組左側(cè)與C組左側(cè)相比較明顯降低(

11、P<0.01)。
　　 結(jié)論：長時間單肺通氣可以導(dǎo)致急性肺損傷，這種損傷是不均一性的，損傷的程度與單肺通氣時間相關(guān)，且非通氣側(cè)肺要比通氣側(cè)肺損傷嚴(yán)重。
　　 第三部分
　　 目的：通過建立兔單肺通氣模型，觀察NF-κB在單肺通氣肺損傷中的作用及對炎性因子TNF-和ICAM-1的影響，以探討單肺通氣肺損傷的機(jī)制。
　　 方法：健康日本大耳白兔18 只,隨機(jī)分為3組：TLV組、OLV組和PDTC組，各6 只。

12、TLV組實(shí)施雙肺機(jī)械通氣3h。OLV組采用自制雙腔氣管導(dǎo)管實(shí)施右側(cè)單肺通氣2h 后恢復(fù)雙肺通氣1h。PDTC組在實(shí)施單肺通氣前由靜脈輸入PDTC50mg/kg，其后操作與OLV組相同。在實(shí)驗結(jié)束前由股動脈抽取動脈血做血?dú)夥治鰷y定氧合指數(shù)。各組左右肺分開處理。光學(xué)顯微鏡下觀測各組肺組織病理改變，并計算肺損傷評分；檢測各肺組織濕/干重比值、MPO、MDA、SOD ；Wes t er n Bl ot檢測肺細(xì)胞核內(nèi)NF-κ B p65蛋白和胞漿

13、內(nèi)I κ B-α的表達(dá)水平；EMSA檢測肺組織細(xì)胞NF-κ B的活性；ELISA測TNF-α和ICAM-1的含量，并用RT-PCR檢測肺組織中TNF-α和細(xì)胞粘附分子(ICAM-1)基因mRNA的表達(dá)水平。
　　 第四部分
　　 目的：研究在兔OLV 模型中采用肺保護(hù)性通氣，同時降低吸入氧濃度，觀察其對肺部炎癥反應(yīng)和NF-κ B 表達(dá)的影響，探討OLV 時合理的通氣模式。
　　 方法：健康日本大耳白兔18 只,隨

14、機(jī)分為3組：A組、B組和C組，各6 只。采用自制雙腔氣管導(dǎo)管建立單肺通氣模型，右單肺通氣2h 后恢復(fù)雙肺通氣1h。呼吸機(jī)通氣參數(shù)為：A組，RR 40/min，VT 10 ml/kg，F(xiàn)iO2100[％]；B組，RR 40/min，VT 7 ml/kg，PEEP 5cmH2O，F(xiàn)iO2 100[％]；C組，RR 40/min，VT 7 ml/kg，PEEP 5cmH2O，F(xiàn)iO2 60％。分別在OLV前、OLV 后30min和恢復(fù)雙肺通氣

15、(TLV)30min 三個時間點(diǎn)做動脈血?dú)夥治霾⒂嬎阊鹾现笖?shù)。各組左右肺分開處理。光學(xué)顯微鏡下觀測各組肺組織病理改變，并計算肺損傷評分；檢測各肺組織濕/干重比值、MPO、MDA、SOD ；Wes t er n Bl ot檢測肺細(xì)胞核內(nèi)NF-κ B p65蛋白和胞漿內(nèi)I κ B-α的表達(dá)水平；EMSA檢測肺組織細(xì)胞NF-κ B的活性；ELISA 測TNF-α和ICAM-1的含量，RT-PCR檢測肺組織中TNF-α和ICAM-1mRNA的表