殼聚糖海綿復(fù)合脂肪干細(xì)胞膜片對(duì)2型糖尿病大鼠顱骨極限骨缺損愈合促進(jìn)作用的研究.pdf

1、隨著口腔種植技術(shù)的進(jìn)步與創(chuàng)新，T2DM已是種植非禁忌證，但是T2DM患者的種植失敗率仍明顯高于正?；颊?。在臨床工作中，糖尿病患者拔牙后拔牙窩?？梢姽怯喜涣?，即使植入常規(guī)骨替代材料后其骨愈合效果往往也并不理想。因此，研究適合 T2DM患者的骨替代材料具有非常重要的意義。ASCs是近些年來的研究熱點(diǎn)，對(duì)骨缺損修復(fù)同樣具有革命性意義，是骨組織工程中的干細(xì)胞理想來源。因此我們提出，采用ASCs構(gòu)建的生物材料對(duì)T2DM狀態(tài)下的骨形成具有重要的促

2、進(jìn)作用。在評(píng)價(jià)生物材料成骨效應(yīng)之前，首先應(yīng)當(dāng)建立的是標(biāo)準(zhǔn)的CSD模型，遺憾的是如今國(guó)內(nèi)外對(duì)于CSD模型的研究主要集中于正常動(dòng)物模型，對(duì)于T2DM狀態(tài)下CSD的大小尚屬未知，這勢(shì)必影響評(píng)價(jià)骨修復(fù)材料在T2DM狀態(tài)下的生物活性的可信度。
　　基于此，本研究分為兩個(gè)部分，首先，通過構(gòu)建T2DM大鼠及正常大鼠顱骨系列骨缺損模型，探索 T2DM狀態(tài)下大鼠顱骨 CSD值；其次，以殼聚糖海綿為支架，與ASCs膜片復(fù)合后植入T2DM大鼠顱骨CSD

3、模型，觀察殼聚糖海綿復(fù)合ASCs膜片對(duì)T2DM大鼠顱骨CSD模型骨愈合的促進(jìn)作用。
　　第一部分T2DM大鼠顱骨CSD模型的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探索T2DM大鼠顱骨CSD值的大小。
　　方法：選擇SPF級(jí)9周齡SD大鼠，體重300-320 g，用高脂高糖飼料＋小劑量STZ腹腔注射誘導(dǎo)T2DM大鼠模型，建模成功后，將T2DM大鼠及正常大鼠各隨機(jī)分為4組，每組3只，分別于顱骨中央?yún)^(qū)制備直徑為2、3、4、5 mm，穿透顱骨到

4、達(dá)硬腦膜的骨缺損；術(shù)后8周取材，分別行大體觀察、X線檢查及組織學(xué)染色。
　　結(jié)果：T2DM大鼠行顱骨缺損術(shù)后8周，直徑2 mm的顱骨缺損愈合完全，X線阻射，組織學(xué)檢測(cè)可見新骨生成良好；直徑3、4、5 mm的顱骨缺損愈合不完整，X線透射，新骨生成不足。正常大鼠直徑2、3、4 mm的缺損愈合完全，X線阻射，組織學(xué)檢測(cè)可見新骨生成良好；直徑5 mm的缺損未見愈合，X線透射，新骨生成較少。
　　結(jié)論：T2DM大鼠的顱骨骨缺損區(qū)愈合明

5、顯差于正常大鼠；T2DM大鼠顱骨CSD參考直徑可定義為3 mm。
　　第二部分殼聚糖海綿復(fù)合ASCs膜片對(duì)T2DM大鼠顱骨CSD愈合促進(jìn)作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：觀察殼聚糖復(fù)合ASCs膜片能否促進(jìn)T2DM大鼠顱骨CSD的愈合。
　　方法：體外分離培養(yǎng)大鼠原代ASCs細(xì)胞，通過BCIP/NBT染色、天狼星紅染色、茜素紅染色觀察ASCs的成骨能力，油紅O染色觀察ASCs的成脂能力；使用冷凍干燥機(jī)制備殼聚糖海綿；誘導(dǎo)ASCs

6、成膜后與支架海綿復(fù)合，通過DAPI染色、SEM觀察殼聚糖海綿攜帶ASCs的能力；天狼星紅染色觀察ASCs膜片成膠原能力；并將殼聚糖復(fù)合ASCs膜片植入到T2DM大鼠顱骨CSD骨缺損區(qū)，對(duì)照組僅制備缺損不移植任何材料，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠各5只。8周后取材，通過大體觀察、Micro CT掃描、組織學(xué)染色觀察殼聚糖復(fù)合ASCs膜片對(duì)于T2DM大鼠顱骨CSD愈合的促進(jìn)情況。
　　結(jié)果：ASCs具有成骨、成脂多向分化能力；殼聚糖海綿能夠很好