骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及GDNF基因修飾后對大鼠脊髓損傷修復(fù)的研究.pdf

1、該研究的主要是通過細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)基因工程技術(shù)的方法,首先先將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)純化,然后將其誘導(dǎo)為神經(jīng)細(xì)胞并進(jìn)行神經(jīng)遞質(zhì)的鑒定;以腺相關(guān)病毒為載體,將膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)轉(zhuǎn)入骨髓間充質(zhì)量干細(xì)胞,用細(xì)胞免疫組化和Western blot鑒定目的基因的表達(dá),最后移植攜帶GDNF基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞到脊髓損傷處,通過大鼠動(dòng)物行為學(xué)評分和骨髓誘發(fā)電位檢測等評價(jià)指標(biāo),觀察GDNF轉(zhuǎn)基因治療對大鼠損傷的脊髓功

2、能恢復(fù)的影響,從而為脊髓損傷基因治療的臨床應(yīng)用提供可靠的理論基礎(chǔ).第一部分:大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和生物學(xué)特性研究;目的:從大鼠骨髓分離、培養(yǎng)和純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSCs,觀察其生物學(xué)特性及超微結(jié)構(gòu),為今后在組織工程中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ).結(jié)論:用1.073的Percoll在體外分離純化的MSCs貼壁率高,增殖迅速,多次傳代仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性,超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為早期幼稚細(xì)胞特點(diǎn).第二部分:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)為神經(jīng)細(xì)胞的研究;目

3、的:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)除了具有自我更新和多向分化潛能等重要特征外,還具有容易獲得、取材方便、可以自體移植等優(yōu)勢,因而在組織工程和細(xì)胞治療等方面具有廣闊得應(yīng)用前景.為了獲得有效的治療效果,在移植之前必須解決體外擴(kuò)增及定向誘導(dǎo)分化等問題.該實(shí)驗(yàn)用相差顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)、尼氏染色和透射電鏡等手段觀察了大鼠MSCs體外增殖能力及MSCs在體外向神經(jīng)細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化的能力,為MSCs在神經(jīng)移植領(lǐng)域的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ).結(jié)論:MSCs

4、具有干細(xì)胞的分化潛能,體外可被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞,誘導(dǎo)后的細(xì)胞有合成神經(jīng)遞質(zhì)的能力并具有發(fā)育早期神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn).第三部分:GDNF基因重組腺相關(guān)病毒體外轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其鑒定;目的:為了使膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)基因轉(zhuǎn)入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)并檢測目的基因的有效表達(dá).結(jié)論:1.AAV能夠以較高的效率攜帶GDNF基因感染MSCs并能有效表達(dá);2.MSCs易于轉(zhuǎn)入外源基因,是基因治療的理想載體細(xì)胞.第四部分