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文檔簡介
1、目的1．大量擴增PTB-30m重組質(zhì)粒。2．評價DNA一85B和BCG序貫免疫能否誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生優(yōu)于常規(guī)BCG免疫的抗結(jié)核免疫保護作用。 方法1.將少量PTB-30m重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α中擴增；用含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基進行篩選；在含氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)；用質(zhì)粒抽提試劑盒抽提得到高純度的PTB-30m重組質(zhì)粒(通過紫外分光光度計測A260或A260／A280)；最后用HindIII和EcoreI作雙酶切，
2、1％瓊脂糖凝膠電泳(電壓170伏左右、時間約20分鐘)。2．用PTB-30m重組質(zhì)粒初次免疫C57BL／6小鼠，2周后用BCG加強免疫，分別于4周和8周后處死小鼠，制備脾淋巴細胞，用PPD刺激培養(yǎng)后分別用MTT法作淋巴細胞增殖轉(zhuǎn)化試驗；用EUSA試劑盒檢測脾淋巴細胞培養(yǎng)上清中IL2和IFN-γ含量；用流式細胞儀檢測脾淋巴細胞表面CD25(IL一2Rα)的表達百分率。 結(jié)果1.共獲得高純度PTB-30m重組質(zhì)粒4856g，經(jīng)雙酶切
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