湘西宏成制藥不同基地泡桐的分子鑒定及活性成分的檢測(cè).pdf

1、本研究基于核rRNA基因ITS序列、葉綠體DNA基因間隔序列psbA-trnH和trnL-trnF鑒定湘西宏成制藥公司不同栽培基地的泡桐,通過(guò)HPLC法檢測(cè)泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量及其不同月份中的含量變化,用GC-MS法測(cè)定泡桐葉片、復(fù)方桐葉燒傷油及其調(diào)劑芝麻油的化學(xué)成分,為泡桐優(yōu)勢(shì)品種的選育和藥物質(zhì)量的控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　用3對(duì)特異性引物經(jīng)PCR從泡桐總DNA中分別擴(kuò)增出600bp的ITS序列、550bp的psbA-tr

2、nH序列和900bp的trnL-trnF序列,用ClustalX7.0軟件和MEGA3.1軟件對(duì)DNA序列進(jìn)行了相似性比較及系統(tǒng)發(fā)育分析。結(jié)果顯示已登錄的毛泡桐ITS序列與1號(hào)和2號(hào)基地泡桐的相似性高于95％,與3號(hào)、4號(hào)基地和吉首大學(xué)校園泡桐的相似性低于80%;毛泡桐trnL-trnF序列與1號(hào)和2號(hào)基地泡桐的相似性均為99.5%,與3號(hào)、4號(hào)基地和吉首大學(xué)校園泡桐的相似性都低于70%;而4個(gè)基地和吉首大學(xué)校園泡桐psbA-trnH序

3、列的相似性都高于99%。結(jié)果表明,1號(hào)和2號(hào)基地泡桐可能是毛泡桐,3號(hào)、4號(hào)基地和吉首大學(xué)校園泡桐可能是白花泡桐。
　　通過(guò)HPLC法比較湘西宏成制藥公司4個(gè)基地和我國(guó)部分地區(qū)泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量,同時(shí)檢測(cè)6月至9月4個(gè)基地泡桐葉熊果酸和木犀草素含量的變化。所采用的色譜柱為Shim-Pack C18(4.6mm×150mm,5μm),測(cè)定熊果酸的流動(dòng)相為甲醇-0.5%乙酸溶液(85:15),流速為1.0mL/min,檢測(cè)波

4、長(zhǎng)210nm;測(cè)定木犀草素的流動(dòng)相為甲醇-水-乙酸(60:39:1),流速為1.0mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)350nm。結(jié)果表明,4號(hào)基地泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量顯著高于其他3個(gè)基地的泡桐,而且7月份的泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量最高。
　　用乙醇、氯仿和正已烷等不同有機(jī)溶劑對(duì)泡桐葉、復(fù)方桐葉燒傷油及其溶劑芝麻油進(jìn)行提取,用GC-MS法測(cè)定提取物的化學(xué)成分。結(jié)果表明,復(fù)方桐葉燒傷油的主要化學(xué)組分來(lái)自于生產(chǎn)原料泡桐葉和芝麻油且生產(chǎn)過(guò)