紅花生理活性成分的分離、純化及結構鑒定.pdf

1、紅花(Flos carthami)系菊科植物紅花(Carthamusr tinctorius L.)的干燥花，是一種傳統(tǒng)的活血化瘀、通經(jīng)止痛的常用中藥。近代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，紅花具有抗凝血、抗血栓、抗氧化等生理活性，在防治腦血栓、心肌梗塞、冠心病等心腦血管疾病方面有確切療效。 本文對紅花抗凝血主要活性成分進行了篩選、分離、純化和結構鑒定；研究了其生理活性以及含量的測定方法；建立了主要活性成分紅花黃色素的浸提動力學模型，優(yōu)化了其提取與

2、精制的工藝條件，并對其穩(wěn)定性進行了探討。 利用溶劑萃取、乙醇沉淀、聚酰胺吸附層析等方法對紅花粗提物進行逐步分離，以體外抗凝血活性為指標進行活性追蹤，篩選出了抗凝血活性最強的組分(F3組分)。利用反相硅膠(ODS)柱、Sephadex LH-20柱對組分F3進行反復層析、純化，得到了化合物A～G共7個單體。 通過紫外光譜、電噴霧質(zhì)譜及核磁共振等手段，在參閱相關文獻數(shù)據(jù)的基礎上對所得到的7個單體進行了結構鑒定。結果發(fā)現(xiàn)7個單

3、體均為半醌式查耳酮類化合物，屬于紅花黃色素類成分。證實紅花黃色素為紅花活血化瘀、抗凝血、防血栓的主要成分。化合物A、C、G尚未見到有文獻報道。 體外抗凝血試驗發(fā)現(xiàn)，當劑量為50μg/mL時，化合物A～G可使活化部分凝血酶原時間(APTT)增加到對照組的2.1～3.7倍，凝血酶時間(TT)增加到對照組的1.6～3.6倍?？疾鞆募t花中篩選分離得到的抗凝血組分F3對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響，發(fā)現(xiàn)組分F3對膠原蛋白．腎上腺素誘發(fā)小鼠血栓形

4、成的抑制率為33.3％～66.7％；對血管損傷誘發(fā)小鼠血栓形成的抑制率為17.9％～52.7％，并呈量．效相關性。 采用脂質(zhì)體氧化法研究了化合物A～G的抗氧化能力?；衔顰～G抗脂質(zhì)體氧化能力為： G>F>B≈Vc>D>C>A>E。比較了化合物A～G對化學發(fā)光法產(chǎn)生的超氧陰離子自由基[O<,2><'->]、羥基自由基[·OH]和穩(wěn)定自由基-N，N-二苯基三硝基苯肼自由基[DPPH·]的清除效果。清除超氧陰離子自由基[O<,2><

5、'-·>]的能力： F>G>D≈Vc>B>C≈A>E；清除羥基自由基[OH]的能力： F>G>D>Vc>B>C>A>E；清除N，N-二苯基三硝基苯肼自由基[DPPH·]的能力： F>G>Vc>B>D>C>A>E。 對高效液相色譜法和分光光度法測定紅花黃色素含量進行了研究，確立了檢測波長和色譜條件。5種不同產(chǎn)地的紅花，總黃色素含量(以羥基紅花黃色素A計)在2.43％～6.14％之間，有顯著差別。 以質(zhì)量平衡方程式和Arrh

6、enius方程為基礎，通過試驗測定與計算，得到了紅花黃色素浸提的動力學參數(shù)，建立了浸提的動力學模型。 采用響應面分析法對紅花黃色素提取的工藝條件進行了優(yōu)化。以pH8.2的水溶液為溶劑，液料比25:1(mL/g)，提取溫度53℃，提取時間64min，黃色素的浸提率最高，此條件下經(jīng)2次浸提，黃色素浸提率可達到92.5％。 測定14種大孔吸附樹脂對紅花黃色素的吸附率與解吸率，發(fā)現(xiàn)X-5大孔吸附樹脂最適合紅花黃色素的精制。紅花黃

7、色素水提液在X-5樹脂上的吸附流速為每小時4.8倍床體積，用50％乙醇水溶液解吸，解吸流速為每小時2.0倍床體積，解吸劑用量為4.0床體積時，精制效果較好，可使黃色素含量由13.4％提高到45.6％，回收率為90.2％。 研究了溫度、光照、及相態(tài)對紅花黃色素穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)水溶液狀態(tài)下，黃色素對光照和高溫較敏感，易于分解破壞，而固態(tài)紅花黃色素比較穩(wěn)定。在室溫、避光條件下存放100天，水溶液狀態(tài)黃色素破壞率高達59.5％，而固態(tài)