1型糖尿病大鼠腎組織PEDF、VEGF的表達(dá)變化及坎地沙坦干預(yù)研究.pdf

1、目的:應(yīng)用鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型，以了解其腎臟組織中PEDF、VEGF的表達(dá)水平。同時(shí)觀察坎地沙坦干預(yù)對(duì)腎臟PEDF、VEGF表達(dá)的影響，探討PEDF、VEGF在糖尿病腎病(DN)中的作用以及坎地沙坦對(duì)腎臟發(fā)揮保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 方法:雄性Wistar大鼠36只，體重160-200g，隨機(jī)分3組，其中正常對(duì)照組(NC組)12只，糖尿病組（DM組）12只，坎地沙坦干預(yù)組(DM-C組)12只。大鼠禁食12h后

2、，DM組、DM-C組給予一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50mg/Kg以誘導(dǎo)1型糖尿病大鼠的模型;NC組大鼠僅給予腹腔注射等體積的檸檬酸緩沖液。72小時(shí)后用血糖儀測(cè)定大鼠尾尖部血糖，隨機(jī)血糖大于16.7mmol/L視為糖尿病大鼠造模成功;給予DM-C組大鼠坎地沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃，而NC組和DM組僅等容積生理鹽水灌胃。干預(yù)12周末，用代謝籠收集大鼠24h尿液，記尿量，測(cè)定24小時(shí)尿白蛋白排泄量(urinary albumi

3、n excretion，UAE);全部大鼠記錄體重后留取血標(biāo)本，測(cè)大鼠空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);切取右腎后，去掉被膜，并稱重，光鏡及透射電鏡下觀察腎臟的形態(tài)學(xué)變化，免疫組化法觀察腎小球和腎小管PEDF和VEGF的蛋白表達(dá)水平;快速切取左腎，并分裝，將其置于-70℃冰箱中保存，RT-PCR方法檢測(cè)腎組織PEDF及VEGF的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)

4、結(jié)束時(shí)NC組、DM組、DM-C組大鼠分別存活12只、10只、9只大鼠。
　　 1、空腹血糖(FBG)、體重(BW):DM組和DM-C組大鼠的FBG、BW較NC組大鼠顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），而DM組與DM-C組大鼠FBG、BW差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。
　　 2、各組大鼠腎功能(Scr、BUN)、KW/BW、UAE的比較:與NC組相比，DM組和DM-C組大鼠Scr、BUN明顯增加，差異均有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。DM-C組大鼠的Scr、BUN與DM組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。與NC組大鼠相比，DM組和DM-C組KW/BW明顯增高，24小時(shí)UAE明顯增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），DM-C組較DM組KW/BW明顯減小，24小時(shí)UAE明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 3、免疫組化:①NC組腎小球及腎小管均可見大量的PEDF表達(dá)，主要集中于腎小球系膜區(qū)和

6、基底膜區(qū)域。而DM組和DM-C組腎小球和腎小管PEDF的表達(dá)較NC組明顯減少（P均＜0.01）;DM-C組PEDF的表達(dá)較DM組明顯增多(P＜0.01)。②NC組大鼠的腎小球及腎小管僅見極少的VEGF表達(dá)，而DM組、DM-C組大鼠的腎小球及腎小管VEGF的表達(dá)顯著增加(P＜0.01);DM-C組腎小球和腎小管中VEGF的表達(dá)較DM組明顯減少(P＜0.01)。
　　 4、腎臟病理形態(tài)學(xué)改變:HE染色和PAS染色中NC組腎小球及腎小

7、管均未見明顯異常。HE染色:與NC組相比，DM組和DM-C組大鼠腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)紊亂，腎小球肥大，系膜區(qū)擴(kuò)張，部分腎小球出現(xiàn)體積縮小，部分腎小管萎縮;PAS染色:與NC組相比，DM組和DM-C組大鼠腎小球內(nèi)PAS陽性染色增強(qiáng)，說明腎小球系膜區(qū)增寬，基底膜增厚。透射電鏡顯示DM組和DM-C組大鼠腎小球的基底膜增厚，足突融合、破壞。與DM組相比，DM-C組上述病理改變均明顯改善。
　　 5、腎組織PEDF、VEGF的基因表達(dá):①D

8、M和DM-C組大鼠的腎臟PEDF的mRNA表達(dá)水平較NC組大鼠明顯減少(P＜0.01);而DM-C組大鼠腎臟PEDF的mRNA表達(dá)水平較DM組大鼠明顯增加(P＜0.05)，但仍少于NC組(P＜0.01)。②DM組和DM-C大鼠腎臟VEGF的mRNA表達(dá)水平較NC組大鼠顯著增加(P＜0.01);DM-C組大鼠腎臟VEGF的mRNA表達(dá)水平較DM組大鼠顯著減少（P＜0.05），但仍高于NC組(P＜0.01)。
　　 6、Pearso

9、n相關(guān)分析顯示:大鼠腎臟PEDF的基因表達(dá)水平與24小時(shí)UAE呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.696，P＜0.01)，VEGF的基因表達(dá)水平與24小時(shí)UAE呈顯著正相關(guān)(r=0.767，P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1、糖尿病大鼠腎組織PEDF的表達(dá)明顯減少，而VEGF的表達(dá)明顯增多，同時(shí)伴有24小時(shí)尿白蛋白排泄量的增加、腎功能的異常。
　　 2、坎地沙坦可降低糖尿病大鼠24小時(shí)尿白蛋白排泄量，減輕腎臟的病理損傷