纈沙坦對糖尿病大鼠腎組織中JNK通路和bcl-2因子的干預作用.pdf

1、目的:糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)最常見而嚴重的并發(fā)癥,其發(fā)生率呈逐年上升的趨勢,經(jīng)統(tǒng)計,由DN而引起的終末期腎病(end stage renal disease,ESRD)在發(fā)達國家已占40％～50％。據(jù)了解,在糖尿病腎病的腎組織中有細胞凋亡的存在,近年來,國內(nèi)外細胞凋亡的研究越來越深入,JNK通路引起細胞凋亡途徑是近年才發(fā)現(xiàn)的一種凋亡途徑。Bcl-2

2、是bcl-2家族中最有代表性的抑制細胞凋亡的因子之一。糖尿病腎病時腎臟細胞凋亡是否與JNK通路有關(guān),JNK通路與bcl-2的表達是否有一定的相關(guān)性,纈沙坦減少尿蛋白,保護腎臟功能的作用是否與抑制細胞凋亡有一定關(guān)系,關(guān)于這些問題的研究報道不多,本研究應用1型糖尿病大鼠模型,檢測了腎臟JNK、p-ink、c-Jun和bcl-2的表達和細胞凋亡程度,同時了解纈沙坦是否對JNK通路和bcl-2表達有影響。
　　 方法:
　　 將

3、清潔級Wistar大鼠隨機分為正常對照(N組)和實驗組。實驗組腹腔注射鏈脲佐菌素,N組只注射等體積的枸櫞酸鹽緩沖液,將造模成功的大鼠隨機分為糖尿病組(DM組)和藥物干預組(T組),T組于造模成功后第一天給予纈沙坦灌胃,其余兩組給予等量安慰劑。于注射STZ后2、4、8周留取三組大鼠的24小時尿液測尿蛋白定量,于4周和8周分兩次處理大鼠,檢測定血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL

4、-C)、血漿白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和尿酸(UA),用免疫組化和Western blotting檢測腎組織中JNK、p-jnk、c-Jun和bcl-2蛋白表達,流式細胞學檢測腎臟細胞凋亡。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計,數(shù)據(jù)用均數(shù)士標準差(x±S)表示,組間比較方差齊采用方差分析,方差不齊采用非參數(shù)檢驗,應用pearson方法進行相關(guān)性分析,P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:

5、　　 1.腎重指數(shù)(KW/BW):4周時DM組KW/BW與N組KW/BW比較明顯增加(P＜0.01);T組與DM組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),但T組高于N組(P＜0.01);8周時DM組與N組比較明顯增加(P＜0.01);T組與DM組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),但T組仍有高于N組(P＜0.01)。
　　 2.尿蛋白定量:2周和4周時DM組和T組尿蛋白定量與N組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);8周時D

6、M組與N組比較,排出明顯增加(P＜0.05);T組較DM組減少(P＜0.05),但T組始終高于N組(P＜0.05)。
　　 3.血糖水平:4周DM組和T組血糖值與N組血糖值比較水平明顯升高(P＜0.01);8周時DM組和T組血糖值與N組血糖值比較血糖水平明顯升高(P＜0.01)提示造模成功,并很好維持:T組與DM組之間比較血糖水平有一定程度降低但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。說明本研究中所述指標變化與血糖水平無關(guān)。
　　

7、 4.血脂、腎功能和血漿白蛋白水平:TG、TC、LDL-C、HDL-C、BUN、Scr、UA租ALB在三組間均無統(tǒng)計學差異。
　　 5.免疫組化:JNK、p-jnk和c-Jun表達結(jié)果:4周N組大鼠腎小球、近端及遠端腎小管均有微量JNK、c-Jlun和p-jnk表達;DM組和T組大鼠腎小球,腎小管及腎間質(zhì)中陽性細胞數(shù)目增加,DM組較N組明顯升高(P＜0.05),T組較DM組降低但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);8周DM組大鼠腎

8、組織中JNK、c-Jun和p-jnk在腎小球,腎小管及腎間質(zhì)中表達均較4周時增加,以腎小管的表達增加更加明顯,DM組較N組明顯升高(P＜0.05);T組較DM組降低(P＜0.05),T組較N組表達也有增高(P＜0.05)。Bcl-2在三組大鼠腎臟中均有表達,4周時N組bcl-2主要表達于腎小管,DM組和T組bcl-2表達在近曲小管明顯減少,T組較DM組bcl-2表達在近曲小管略有增加,在遠端小管增加較明顯;DM組較N組明顯降低(P＜0.

9、05),T組較DM組升高但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);8周時T組、DM組和N組中bcl-2的表達依次減少,DM組較N組明顯降低(P＜0.05),T組較DM組升高(P＜0.05),8周時T組較N組表達也有降低(P＜0.05)。
　　 6.Western blotting:4周時,DM組、T組和N組三組間JNK、c-Jun、p-jnk以及bcl-2表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);8周時DM組JNK、c-Jun和p-jn

10、k表達較N組增加(P＜0.05),bcl-2表達降低(P＜0.05),T組JNK和c-Jun表達比DM組降低(P＜0.05),與N組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);T組p-jnk比DM組降低(P＜0.05),比N組升高(P＜0.05);T組bcl-2較DM組升高(P＜0.05),較N組降低(P＜0.05)。
　　 7.流式細胞學:4周時DM組大鼠腎組織細胞凋亡率較N組增加(P＜0.05),與T組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0

11、.05),T組與N組比較無差別;8周時DM組大鼠腎組織細胞凋亡率較N組增加更明顯(P＜0.05),T組與DM組相比較凋亡率降低(P＜0.05),T組較N組凋亡率升高(P＜0.05)。
　　 8.相關(guān)性分析:JNK,p-jnk,c-Jun與細胞凋亡程度呈正相關(guān)(P＜0.01);bcl-2與細胞凋亡程度及JNK,p-jnk,c-Jun均呈負相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.1型糖尿病大鼠腎臟損傷早期就已