亞硒酸鈉對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟保護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高和生活模式的改變，糖尿病血管并發(fā)癥發(fā)生率逐年上升，糖尿病腎病（DN）是糖尿?。―M）微血管并發(fā)癥之一，近年來(lái)發(fā)病率逐年升高，已成為終末期腎?。‥SRD）的首位病因，同時(shí)也是DM的嚴(yán)重并發(fā)癥和主要死亡原因之一。一旦出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿，則病情不可逆轉(zhuǎn)，最終發(fā)展成終末期腎衰竭，只能靠透析和替代治療維持生命。所以早期干預(yù)，阻止或延緩糖尿病腎病病程進(jìn)展，極為必要。 硒是機(jī)體必需的微量元素之一，是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶必需的結(jié)

2、構(gòu)成分，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的主要功能是清除體內(nèi)過(guò)氧化物，維持膜系統(tǒng)的完整性。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)硒具有降低血糖和調(diào)控胰島素介導(dǎo)的代謝過(guò)程等擬胰島素作用。對(duì)糖尿病鼠補(bǔ)充硒不僅可預(yù)防氧化應(yīng)激，而且也可防止腎臟損傷，同時(shí)能改善葡萄糖內(nèi)環(huán)境和增強(qiáng)外周組織對(duì)胰島素的敏感性。但硒在防治糖尿病腎病中的作用及機(jī)制，國(guó)內(nèi)外報(bào)道甚少，所以其在糖尿病腎病中的防治效果和相關(guān)分子機(jī)制值得進(jìn)一步探討。 第一部分亞硒酸鈉對(duì)糖尿病腎病大鼠基本狀況和腎臟病變的干預(yù)作用

3、 目的：通過(guò)鏈尿佐菌素法及長(zhǎng)期高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建糖尿病腎病模型，并長(zhǎng)期給予亞硒酸鈉口服治療，探討硒對(duì)糖尿病腎病大鼠基本狀況的改善和腎臟病變的延緩作用，評(píng)價(jià)硒防治糖尿病腎病的效果。 方法：以鏈尿佐菌素55mg/kg體重劑量一次性腹腔注射及長(zhǎng)期高脂飲食喂養(yǎng)構(gòu)建糖尿病腎病模型，試驗(yàn)設(shè)空白組（N）、糖尿病對(duì)照組（DM）和亞硒酸鈉干預(yù)組（DM-Se），干預(yù)組給予亞硒酸鈉治療。各組大鼠分籠喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)期間自由進(jìn)食、進(jìn)水，自然照明，室溫2

4、0℃-28℃，均不給與胰島素和降糖藥。喂養(yǎng)10周后，觀察各組大鼠全身基本狀況。用代謝籠準(zhǔn)確收集24小時(shí)尿量，用試劑盒檢測(cè)尿24小時(shí)白蛋白和尿肌酐。處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血清，測(cè)定血肌酐、血糖等指標(biāo)。取雙腎，去除腎包膜，用冷生理鹽水灌洗，同時(shí)觀察腎臟大小、顏色、質(zhì)地，稱雙腎重量。快速切取小塊腎皮質(zhì)組織，4％戊二醛固定，制電鏡切片掃描電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。切取腎臟組織，4％多聚甲醛固定，制石蠟切片HE染色光鏡下觀察病理改變。所有數(shù)據(jù)用SPSS11

5、.0軟件包分析統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.藥物干預(yù)組大鼠較模型對(duì)照組全身基本狀況明顯改善，血糖、腎重/體重比值無(wú)明顯變化，而血肌酐、尿24小時(shí)白蛋白等指標(biāo)明顯改善。 2.干預(yù)組大鼠腎臟光鏡下組織形態(tài)病理變化和電鏡下超微結(jié)構(gòu)均較模型對(duì)照組明顯改善。 結(jié)論： 1.亞硒酸鈉能顯著改善糖尿病腎病大鼠的全身狀況。 2.亞硒酸鈉能延緩糖尿病腎病大鼠的腎臟病變。 第二部分亞硒酸鈉對(duì)糖尿病腎病大鼠腎

6、臟p38MAPK、nephrin、adiponectin表達(dá)的影響 目的：通過(guò)鏈尿佐菌素法及長(zhǎng)期高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建糖尿病腎病模型，并長(zhǎng)期給予亞硒酸鈉口服治療，探討硒對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟p38MAPK、nephrin、adiponectin表達(dá)的影響，從而研究硒在防治糖尿病腎病中的作用機(jī)制。 方法：以鏈尿佐菌素55mg/kg體重劑量一次性腹腔注射及長(zhǎng)期給予高脂飲食喂養(yǎng)構(gòu)建糖尿病腎病模型，試驗(yàn)設(shè)空白組（N）、糖尿病對(duì)照組（DM

7、）和亞硒酸鈉干預(yù)組（DM-Se），干預(yù)組給予亞硒酸鈉治療。各組大鼠分籠喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)期間自由進(jìn)食、進(jìn)水，自然照明，室溫20℃-28℃，均不給與胰島素和降糖藥。喂養(yǎng)10周后，處死大鼠，取雙腎，去除腎包膜，用冷生理鹽水灌洗，同時(shí)觀察腎臟大小、顏色、質(zhì)地，稱雙腎重量。切取腎臟組織，4％多聚甲醛固定，制石蠟切片免疫組化分析p38MAPK、nephrin、adiponectin蛋白表達(dá)。切取雙腎組織投入液氮凍存，組織勻漿提取總RNA和總蛋白分別用PC

8、R法和Western blotting法分析p38MAPK、nephrin、adiponectin mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)。相關(guān)軟件分析圖片，獲得數(shù)據(jù)。所有數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件包分析統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、干預(yù)組p38 MAPK mRNA及蛋白表達(dá)均較模型對(duì)照組降低，但較空白組高。 2、干預(yù)組nephrin mRNA及蛋白表達(dá)均較模型對(duì)照組增加，但較空白組低。 3、干預(yù)組adiponectin m