核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性變化對(duì)膠質(zhì)瘤藥物治療作用影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 NF-κBp65、EGFR、PCNA蛋白在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性研究 目的:研究核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB亞基p65蛋白、表皮生長(zhǎng)因子受體及增殖細(xì)胞核抗原在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá),探討NF-κB、EGFR及PCNA蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤病理級(jí)別之間的關(guān)系以及NF-κB、EGFR及PCNA之間的相關(guān)性.方法:實(shí)驗(yàn)組56例人腦膠質(zhì)瘤按病理級(jí)別分為Ⅰ-Ⅱ級(jí)組、Ⅲ級(jí)組和Ⅳ級(jí)組,8例取自腦外傷減壓術(shù)中的腦組織作為對(duì)照組.應(yīng)用免疫組化方法對(duì)實(shí)驗(yàn)組及

2、對(duì)照組標(biāo)本中NF-κB亞基p65、EGFR、PCNA蛋白進(jìn)行檢測(cè).第二部分 NF-κB、IκB活性變化對(duì)TNF-α誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡作用的影響 目的:研究TNF-α對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的生長(zhǎng)抑制作用、誘導(dǎo)凋亡作用及對(duì)NF-κB、IκB活性的影響,同時(shí)研究NF-κB抑制劑PDTC對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及NF-κB、IκB活性變化的影響,探討抑制NF-κB活性在膠質(zhì)瘤生物治療中的作用.方法:用不同濃度的TNF-α或TNF

3、-α+PDTC作用于人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251,觀察U251細(xì)胞生長(zhǎng)的情況并繪制生長(zhǎng)曲線,用MTT法檢測(cè)其對(duì)U251細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率;用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)U251細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用;用相同劑量的TNF-α(20ng/ml)或TNF-α(20ng/ml)+PDTC(10μmol/L)以不同的時(shí)間(5、10、30、60、120min)作用于U251細(xì)胞,用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)U251細(xì)胞中p65蛋白表達(dá)的變化,用Western blot檢測(cè)Iκ

4、Bα蛋白表達(dá)水平的變化.第三部分 順鉑聯(lián)合NF-κB抑止劑PDTC對(duì)裸鼠U251皮下移植瘤治療作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的:研究順鉑聯(lián)合NF-κB抑制劑PDTC對(duì)裸鼠U251移植瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用及對(duì)細(xì)胞周期的影響,觀察在治療過(guò)程中NF-κB亞基p65蛋白及IκBαmRNA表達(dá)的變化.探討抑制NF-κB的活性對(duì)膠質(zhì)瘤化療的影響.結(jié)論:CDDP能抑制裸鼠U251移植瘤生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡.使細(xì)胞周期阻滯于G<,0>/G<,1>期,抑制細(xì)胞增殖.C