PUMA在胃癌中的表達(dá)和作用機(jī)制研究.pdf

1、胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率位居第二。胃癌的發(fā)病機(jī)制主要包括原癌基因的異常激活以及抑癌基因(TSGs)的失活。除突變等遺傳學(xué)異常外，表觀遺傳學(xué)調(diào)控異常，如組蛋白修飾異常、啟動子甲基化等，也能導(dǎo)致腫瘤抑癌基因在轉(zhuǎn)錄后失活。
　　在癌癥發(fā)展過程中，組蛋白去乙?；軌?qū)е乱职┗虻霓D(zhuǎn)錄被沉默，這一過程需要組蛋白去乙酰酶（HDACs）的參與，然而有趣的是，許多被沉默的抑癌基因都能夠被組蛋白去乙酰酶抑制劑(HDACis)復(fù)活?；?/p>

2、于這一特點(diǎn)，組蛋白去乙酰酶抑制劑有望成為一種新的腫瘤治療策略。曲古菌素A(TSA)是組蛋白去乙酰酶的選擇性抑制劑，被廣泛用于復(fù)活抑癌基因的表達(dá)。通過比較TSA處理前后基因表達(dá)譜的變化我們發(fā)現(xiàn)，TSA處理后，PUMA基因表達(dá)水平出現(xiàn)了明顯的上調(diào)。
　　PUMA基因最初作為P53基因誘導(dǎo)凋亡中的一種重要介質(zhì)而被人們熟知，在P53依賴性與非P53依賴性凋亡中均扮演著非常重要的角色。PUMA也是一種抑癌基因，在藥物誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡中起

3、重要作用，然而該基因在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起怎樣的作用，迄今為止，我們知之尚少。
　　本研究中，我們旨在了解PUMA基因在胃癌中的表達(dá)情況，并進(jìn)一步探究該基因與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)性及其對胃癌生物學(xué)行為的影響。
　　材料和方法:
　　1.挑選人類正常胃粘膜上皮細(xì)胞株GES-1以及六個胃癌細(xì)胞株(AGS、SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823、NCI-N87)。使用實(shí)時定量RT-PCR檢測不同細(xì)胞株中PUMA

4、 mRNA的表達(dá)水平。
　　2.用Western Blotting方法檢測上述七種細(xì)胞株中PUMA蛋白表達(dá)水平。
　　3.收集24例胃癌組織標(biāo)本，使用實(shí)時定量RT-PCR檢測胃癌組織與癌旁正常組織中PUMA mRNA表達(dá)水平。
　　4.通過搜索www.oncomine.org數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用Mann-Whitney test、Logrank test、Cox's regression model等統(tǒng)計學(xué)方法分析PUMA基因

5、與胃癌臨床特征的關(guān)聯(lián)性。
　　5.應(yīng)用攜帶有PUMA基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MKN28和SGC7901這兩種胃癌細(xì)胞株，然后通過MTS法及流式細(xì)胞術(shù)分析PUMA基因表達(dá)增加對胃癌細(xì)胞增殖能力及凋亡的影響
　　6.應(yīng)用SiRNA敲減GES-1胃癌細(xì)胞中PUMA基因的表達(dá)，并通過MTS法檢測分析PUMA基因表達(dá)減少對胃癌細(xì)胞增殖能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1.與正常胃粘膜上皮細(xì)胞株相比，在大多數(shù)胃癌細(xì)胞株中，PUMA基因無論

6、在mRNA還是在蛋白質(zhì)水平均表現(xiàn)為明顯的表達(dá)下調(diào);此外，與癌旁正常組織相比，胃癌組織中PUMA mRNA表達(dá)水平也表現(xiàn)為顯著下降(P＜0.05)。
　　2.PUMA mRNA的表達(dá)水平與胃癌臨床分期、HP感染、Lauren分型這三個因素?zé)o明顯相關(guān)性;然而，與生存期超過3年的患者相比，生存期低于3年的患者，其PUMA mRNA表達(dá)水平明顯下降;雖然應(yīng)用Logrank test生存曲線分析未發(fā)現(xiàn)PUMA mRNA表達(dá)水平與總生存具有顯