羅紅霉素對哮喘大鼠IKK-NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的干預(yù)作用.pdf

1、目的：(1)觀察羅紅霉素對哮喘大鼠肺組織IKK/NF-KB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響;(2)探討哮喘大鼠肺組織NF-kB活性和BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ含量的關(guān)系;(3)觀察羅紅霉素、地塞米松對哮喘大鼠氣道反應(yīng)性的影響. 方法：40只雄性SD大鼠應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分成4組,分別是正常對照組(C組)、哮喘組(A組)、羅紅霉素組(R組)和地塞米松組(D組),每組10只.用卵白蛋白制備哮喘大鼠模型,正常對照組用生理鹽水代替OVA

2、進(jìn)行致敏和激發(fā).各組大鼠于末次激發(fā)后24小時,檢測氣道反應(yīng)性后放血處死;各組每只大鼠均經(jīng)肺門結(jié)扎后右肺行支氣管肺泡灌洗并留取支氣管肺泡灌洗液(BALF).對BALF中的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)和分類;光鏡、電鏡觀察肺組織病理及超微結(jié)構(gòu)的變化.ELISA法測定BALF中的IL-4、IL-5、IFN-γ的濃度;原位雜交檢測IKKβ mRNA在肺組織的表達(dá)變化,免疫組化檢測肺組織NF-KBp65活化. 結(jié)果：(1)光鏡觀察:HE染色見哮喘組支氣管

3、及血管周圍、肺間質(zhì)內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞及其他炎性細(xì)胞浸潤,支氣管粘膜下水腫,粘液腺增生,粘膜皺折增多,部分粘膜上皮細(xì)胞脫落,可見氣道黏液栓;對照組未見上述現(xiàn)象;羅紅霉素組上述現(xiàn)象減輕;地塞米松組上述現(xiàn)象明顯減輕. (2)電鏡觀察:哮喘組見肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹、變性、壞死,板層小體空泡,支氣管上皮纖毛排列稀疏、斷裂現(xiàn)象;對照組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞正常;羅紅霉素組、地塞米松組上述現(xiàn)象明顯減輕. (3)BALF中炎癥細(xì)胞計數(shù):BALF中

4、細(xì)胞總數(shù)哮喘組(4.96±0.55)×10<'9>/L高于對照組(1.45±0.24)×10<'9>/L,EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比(EOS﹪)哮喘組(7.25±1.60)﹪高于對照組(0.80±0.35)﹪(P<0.01);BALF中細(xì)胞總數(shù)羅紅霉素組和地塞米松組分別為(4.00±0.97)×10<'9>/L、(2.70±0.59)×10<'9>L、EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比(EOS﹪)羅紅霉素組和地塞米松組分別為(4.00±0.97)﹪

5、和(2.70±0.59)﹪,均低于哮喘組(P<0.01). (4)各組大鼠氣道反應(yīng)性檢測結(jié)果:哮喘組大鼠氣道阻力增加幅度和肺動態(tài)順應(yīng)性下降幅度明顯高于對照組(P<0.01),各哮喘干預(yù)組與哮喘組比較氣道反應(yīng)性下降(P<0.01或P<0.05). (5)BALF中IL-4、IL-5、IFN-Y含量:ELISA法檢測BALF中IL-4含量,哮喘組(49.08±10.26pg/ml)、羅紅霉素組(22.89±5.56 pg/m

6、l)、地塞米松組(18.60±4.54 pg/ml)均高于對照組(9.08±1.77 pg/ml)(P<0.0l), 羅紅霉素組、地塞米松組低于哮喘組(P<0.01);ELISA法檢測BALF中IL-5含量, 哮喘組(25.31±1.93 pg/ml)、羅紅霉素組(10.51±1.78 pg/ml)、地塞米松組(9.29±1.87 pg/ml)均高于對照組(2.56±0.72 pg/ml)(P<0.01), 羅紅霉素組、地塞米松組低于哮

7、喘組, (P<0.01);EUSA法檢測BALF中IFN-Y含量, 哮喘組(27.07±8.17 pg/ml),羅紅霉素組(45.81±9.13 pg/ml),地塞米松組(41.28±7.92 pg/ml)低于對照組(64.93±11.15 pg/ml)(P<0.01),哮喘組(27.07±8.17pg/ml)低于羅紅霉素組、地塞米松組(P<0.01). (6)支氣管上皮IKKβmRNA和NF-kB蛋白的活化:原位雜交顯示IKK

8、 β mRNA主要表達(dá)在支氣管上皮細(xì)胞,以細(xì)胞漿染色為主.哮喘組支氣管上皮細(xì)胞平均OD值(0.294±0.025)明顯高于對照組(0.054±0.010),羅紅霉素組(0.141±0.026)和地塞米松組(0.125±0.017)(P<0.01), 羅紅霉素組、地塞米松組低于哮喘組(P<0.01);組肺組織NF-kB蛋白活化用免疫組化檢測,結(jié)果顯示NF-kB p65表達(dá)于胞漿和胞核;各組大鼠肺支氣管上皮NF-kB p65核陽性率(﹪)哮

9、喘組((31.70±4.49)﹪)明顯高于對照組((8.91±2.26)﹪)(P<0.01).和哮喘組相比較,羅紅霉素組((19.47±2.63)﹪)和地塞米松組((14.77±3.12)﹪)均較低(P<0.01). (7)相關(guān)分析:支氣管上皮IKKβmRNA的含量與NF-k B p65活化呈顯著正相關(guān)(r=0.897,P<0.01, n=40);支氣管NF-k B p65活化與BALF中的lL-4的含量呈顯著正相關(guān)(r=0.8

10、56,P<0.01,n=40);支氣管NF-kB p65活化與BALF中的IL-5的含量呈顯著正相關(guān)(r=0.912,P<0.01,n=40);支氣管NF-kB p65活化與BALF中的IFN-Y的含量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.756,P<0.01, n=40).,大鼠BALF中的IL-4、IL-5的含量與BALF中的EOS百分比均呈顯著正相關(guān)(r=0.875,P<0.01;r=0.921,P<0.01, n=40),大鼠BALF中的IL

11、-4、IL-5的含量與PC25Raw呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.713,p<0.01;r=-0.772,p<0.01,n=34).大鼠BALF中的IL-4、IL-5的含量與PCI5Cdyn呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.738,p<0.01;r=-0.818,p<0.01,n=34). 結(jié)論：(1)哮喘大鼠肺組織IKKβmRNA表達(dá)增多、NF-κB p65活性增強(qiáng),羅紅霉素和地塞米松能抑制IKK/NF-κB的活性; (2)羅紅霉素糾