HDAC2在煙霧暴露哮喘小鼠氣道炎癥的作用及羅紅霉素的干預(yù)研究.pdf

1、目的：觀察香煙煙霧對(duì)哮喘小鼠氣道組蛋白去乙?；?(HDAC2)和氣道炎癥的影響，并進(jìn)一步研究PI3Kδ/Akt信號(hào)通路在上述過(guò)程中的作用，最后探討羅紅霉素(RXM)干預(yù)對(duì)上述過(guò)程的影響以及可能的作用機(jī)制。
　　方法：50只BALB/c小鼠隨機(jī)分為五組，對(duì)照組，哮喘組，暴露組，哮喘+羅紅組，暴露+羅紅組，每組10只。后四組用卵清蛋白(OVA)致敏并激發(fā)，制備哮喘模型，暴露組和羅紅+暴露組在每次激發(fā)后置于自制熏箱里進(jìn)行被動(dòng)吸煙，哮喘

2、+羅紅組和暴露+羅紅組在每次OVA激發(fā)前半小時(shí)予羅紅霉素灌胃。HE染色觀察各組小鼠氣道炎癥和細(xì)胞浸潤(rùn)情況，支氣管肺泡灌洗液(BALF)進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各組小鼠血清中IL-8和TNF-α的表達(dá)，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織HDAC2和p-Akt蛋白的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)肺組織HDAC2、Akt mRNA表達(dá)情況，Western blot法檢測(cè)HDAC2、p-Akt和Akt蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.

3、HE染色結(jié)果顯示對(duì)照組各管腔均未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);哮喘組小鼠可見(jiàn)支氣管及血管周?chē)?、肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主;暴露組小鼠肺組織各管腔周?chē)梢?jiàn)以中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥;哮喘+羅紅組和暴露+羅紅組肺組織HE染色結(jié)果顯示的炎癥表現(xiàn)均較哮喘組和暴露組減輕。
　　2.與對(duì)照組相比，哮喘組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)以及嗜酸性粒細(xì)胞分類計(jì)數(shù)較對(duì)照組高，煙霧暴露組BALF中細(xì)胞總數(shù)以及中性粒

4、細(xì)胞分類計(jì)數(shù)較哮喘組高，哮喘+羅紅組BALF中細(xì)胞總數(shù)以及嗜酸性粒細(xì)胞分類計(jì)數(shù)較哮喘組低，暴露+羅紅組BALF中細(xì)胞總數(shù)以及中性粒細(xì)胞分類計(jì)數(shù)均低于暴露組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3.哮喘組血清IL-8和TNF-α表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P＜0.01);暴露組血清IL-8和TNF-α表達(dá)高于哮喘組（前者P＜0.05，后者P＜0.01）;哮喘+羅紅組血清IL-8和TNF-α表達(dá)低于哮喘組(P＜0.01);暴露+羅紅組血

5、清IL-8和TNF-α表達(dá)低于暴露組(P＜0.01)。
　　4.HDAC2蛋白免疫組化結(jié)果顯示在對(duì)照組有強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(IOD值248.051±20.992);而哮喘組表達(dá)水平低于對(duì)照組(IOD值176.954±9.698);煙霧暴露組只有極少量表達(dá)（IOD值66.415±6.253）;哮喘+羅紅組表達(dá)較哮喘組高(IOD值217.031±12.424)，暴露+羅紅組表達(dá)較暴露組高（IOD值121.878±11.413），。p-Akt在

6、對(duì)照組有極少量表達(dá)（IOD值44.773±5.725），哮喘組表達(dá)較明顯(IOD值107.505±7.551)，煙霧暴露組表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性（IOD值176.334±7.995），哮喘+羅紅組表達(dá)較哮喘組少（IOD值80.278±9.278），暴露+羅紅組表達(dá)較暴露組少(IOD值125.834±8.971)，。
　　5.HDAC2和Akt mRNA在各組間無(wú)明顯變化(P＞0.05)。
　　6.煙霧暴露組氣道HDAC2蛋白表達(dá)明顯低

7、于哮喘組(P＜0.01)，HDAC2蛋白表達(dá)在哮喘組低于對(duì)照組(P＜0.01)。哮喘+羅紅組HDAC2表達(dá)高于哮喘組(P＜0.05)，暴露+羅紅組HDAC2表達(dá)高于暴露組(P＜0.05)。暴露組氣道p-Akt蛋白表達(dá)明顯高于哮喘組(P＜0.01)，哮喘組氣道p-Akt蛋白表達(dá)高于對(duì)照組(P＜0.01)，哮喘+羅紅組p-Akt表達(dá)低于哮喘組(P＜0.01)，暴露+羅紅組p-Akt表低于暴露組(P＜0.05)。各組間總Akt無(wú)明顯改變。