脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向髓核樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：定向誘導(dǎo)大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化為髓核樣細(xì)胞，為椎間盤(pán)退變性疾病的細(xì)胞移植治療奠定生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　 方法：①200g 雄性SD大鼠斷頸處死后，取腹股溝脂肪墊處脂肪，0.1[％]膠原酶消化，體外接種培養(yǎng)，同時(shí)采用極限稀釋法純化細(xì)胞。②利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記進(jìn)行鑒定。③第三代細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后，用1.2[％]海藻酸鈉溶液懸浮，調(diào)整細(xì)胞密度至1×106/ml，滴入3.5[％]CaCl2溶液形成微球，加入含TGF-beta1

2、的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，低氧條件下進(jìn)行微球聯(lián)合培養(yǎng)。④七天后，取部分微球進(jìn)行Alcian Blue染色并收集微球內(nèi)細(xì)胞提取RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)。
　　 結(jié)果：①體外培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞主要呈梭形和多角形，核大、核仁明顯，平行排列生長(zhǎng)或呈漩渦狀生長(zhǎng)。②流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示Sca-1、CD44的陽(yáng)性率分別為95.2[％]、99.7[％]，CD45、CD11b的陽(yáng)性率分別為0.4[％]、1.5[％]。③微球聯(lián)合培養(yǎng)7天后，Alcian