少棘蜈蚣鈉通道毒素NTX-Ssm97的克隆表達(dá)、純化及鑒定.pdf

1、哺乳動(dòng)物鈉通道 Nav1.7主要表達(dá)在初級感覺神經(jīng)元上，介導(dǎo)外周傷害性痛覺刺激信息的中樞傳入，因而 Nav1.7抑制劑有望開發(fā)成為強(qiáng)效的鎮(zhèn)痛藥物。本研究采用同源序列比對的方法從湖北少棘蜈蚣的毒腺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選到了一個(gè)新的毒素多肽基因NTX-Ssm97，該毒素多肽序列與已報(bào)道的Nav1.7抑制性多肽μ-SLPTX-Ssm6a高度同源。采用基因工程技術(shù)，構(gòu)建了pGEX-4T-1-NTX-Ssm97原核表達(dá)載體，并進(jìn)行了毒素多肽的原核誘導(dǎo)

2、表達(dá)和分離純化。MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明純化的NTX-Ssm97成熟肽分子量與理論值基本吻合。用全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)檢測NTX-Ssm97成熟肽的功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NTX-Ssm97成熟肽即使在1μM高濃度時(shí)，也不能顯著抑制小鼠DRG細(xì)胞河豚毒素（Tetrodotoxin，TTX）敏感性鈉通道電流，而以往的文獻(xiàn)報(bào)到表明與NTX-Ssm97高度同源的μ-SLPTX-Ssm6a，對大鼠DRG細(xì)胞上TTX敏感性鈉通道電流的半數(shù)抑制濃度

3、在9nM左右。本研究結(jié)果提示蜈蚣毒腺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫有助于篩選靶向 Nav1.7鈉通道的抑制性毒素多肽基因，通過基因工程方法獲得的NTX-Ssm97成熟肽為其生物功能的檢測提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，有助于對NTX-Ssm97多肽進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，從而便于開展改造后的NTX-Ssm97多肽與Nav1.7相互作用的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系研究。SLPTX-Ssm6a與NTX-Ssm97生理功能上的差異提示我們在以后的研究工作中需同時(shí)表達(dá)純化 SLPTX-Ssm6a與