阿魏酸鈉經(jīng)RhoA-Rho-kinase信號通路對肝硬化大鼠門脈壓力的作用及其機制.pdf

1、【背景及目的】門脈高壓是使肝硬化病人死亡風險增高的重要因素之一。實驗性肝硬化大鼠肝臟中RhoA及Rho-kinase表達水平明顯高于正常大鼠,RhoA/Rho-kinase信號通道的激活導(dǎo)致血管平滑肌收縮并抑制其舒張,從而促進了門脈高壓的發(fā)生。相關(guān)研究報道,阿魏酸能夠降低膽固醇合成,后者合成過程的中間產(chǎn)物GGPP是RhoA活化的關(guān)鍵物質(zhì)。本實驗旨在研究阿魏酸對肝硬化大鼠門脈壓力的作用,并探討相關(guān)分子機制。
　　【方法】用膽管結(jié)扎方

2、法制作肝硬化大鼠模型。實驗動物分為SHAM+NS、BDL+NS及BDL+SF三組,比較分析各組大鼠大體特征及血清肝功能指標。阿魏酸治療對肝臟纖維化程度的影響通過顯微鏡下觀察肝臟HE染色切片、透射電鏡觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)改變,以及免疫組化檢測肝臟a-SMA表達等綜合評定。免疫組化方法檢測各組大鼠肝臟中RhoA、Rho-kinase及eNOS的表達。分離、培養(yǎng)原代大鼠HSC,另購入人肝星狀細胞系LX-2,分別給予阿魏酸/阿魏酸+GGPP處理,流

3、式細胞術(shù)檢測各處理因素作用下細胞凋亡率。原位肝灌注方法測定大鼠原位肝灌注壓力/肝內(nèi)血管阻力,以及由低到高濃度梯度的甲氧明對各組大鼠肝灌注壓力/肝內(nèi)血管阻力的影響。
　　【結(jié)果】經(jīng)BDL術(shù)后肝硬化大鼠的體重顯著低于SHAM+NS組;其肝脾重及肝功能各項指標(ALB除外)均顯著高于SHAM+NS組,而阿魏酸治療對肝硬化大鼠的上述指標均無顯著影響(P>0.05)。病理觀察提示,阿魏酸治療組大鼠肝臟纖維化程度及肝細胞破壞程度較肝硬化組有所

4、減低。免疫組化檢測提示,肝硬化大鼠的肝臟a-SMA、RhoA、Rho-kinase及eNOS表達量均顯著高于SHAM+NS對照組。經(jīng)過阿魏酸治療后,肝硬化大鼠肝臟內(nèi)a-SMA、Rho-kinase表達量明顯減少(P<0.05vs.P<0.05);eNOS表達量增加(P<0.05);而對RhoA的表達量無明顯影響(P>0.05)。細胞學方面,LX-2及大鼠原代HSC細胞凋亡率隨著阿魏酸濃度的增加而升高(相鄰組間比較P<0.01);加入GG

5、PP后,SF濃度為40μg/ml組細胞凋亡率無顯著變化(P>0.05);SF濃度為120μg/ml及360μg/ml組細胞的凋亡率較加入GGPP前有所減低(P<0.05vs.P<0.05)。阿魏酸治療能夠降低肝硬化大鼠的基礎(chǔ)肝內(nèi)血管阻力(P<0.05),以及血管平滑肌對血管收縮劑(甲氧明)的敏感性(P<0.05)。
　　【結(jié)論】阿魏酸在組織病理水平上減低肝硬化大鼠的肝臟纖維化程度,并降低其門脈壓力。后者是通過下調(diào)RhoA/Rho-