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文檔簡(jiǎn)介
1、丹酚酸A(SAA)是唇型科植物丹參的水溶性部分丹酚酸中的主要化學(xué)成分之一,由一分子丹酚素和三分子咖啡酸縮合而成。本實(shí)驗(yàn)室課題組最近研究發(fā)現(xiàn)SAA具有抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞LDH漏出的作用,這為SAA發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷作用提供了細(xì)胞水平上的依據(jù)。本課題為闡明它這一保護(hù)作用的機(jī)制,首先通過建立體外缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞模型來模擬心肌缺血再灌注損傷并應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)的方式,觀察了SAA對(duì)心肌細(xì)胞活力的保護(hù)作用。盡管L-型鈣通道的大量開放是造成
2、鈣超載的重要因?yàn)?但丹酚酸A對(duì)心肌細(xì)胞L-型鈣通道的影響作用至今未見報(bào)道,因此實(shí)驗(yàn)部分二采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)來研究SAA對(duì)心肌細(xì)胞L-型鈣通道電流及其動(dòng)力學(xué)過程的影響作用,與此同時(shí)我們還應(yīng)用活細(xì)胞自動(dòng)成像系統(tǒng)來驗(yàn)證了SAA對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響作用,進(jìn)一步探索其抗心肌缺血再灌注損傷作用的鈣離子機(jī)制。
實(shí)驗(yàn)部分一丹酚酸A對(duì)缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞活力的影響
目的研究丹酚酸A對(duì)缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞活力的影響
3、 方法: SynergyTM4多功能微孔板檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定OD值。
結(jié)果:與正常組比較,模型組心肌細(xì)胞OD值明顯降低(P<0.001);與模型組比較,SAA各劑量組心肌細(xì)胞的OD值明顯增高(P<0.001);SAA高中低劑量組心肌細(xì)胞OD值分別為(0.439±0.007)、(0.395±0.008)、(0.367±0.019)。
結(jié)論: SAA可濃度依賴性的對(duì)抗缺氧復(fù)氧損傷維持細(xì)胞活力。
實(shí)驗(yàn)部分
4、二丹酚酸A對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道的阻滯作用
目的研究丹酚酸A對(duì)大鼠心肌細(xì)胞鈣通道的影響作用。
方法:全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)。
結(jié)果:丹酚酸A濃度依賴性的阻斷I-CaL,SAA10-6,10-5,10-4,10-3mol/L對(duì)I-CaL峰電流的抑制率分別為(16.23±1.3)%(n=6,p<0.05),(22.9±3.6)%(n=6,p<0.05),(53.4±3.0)%(n=8,p<0.01),
5、(62.26±2.9)%(n=6,p<0.01),其IC50為3.83x10-5Smol/L;SAA10-5,10-4mol/L,能使I-V曲線明顯上移,激活曲線明顯右移,但不改變失活、恢復(fù)曲線的形狀。
結(jié)論:丹酚酸A可濃度依賴性的阻斷心肌細(xì)胞鈣通道電流。
實(shí)驗(yàn)部分三丹酚酸A對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響
目的研究丹酚酸A對(duì)大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響作用。
方法:活細(xì)胞自動(dòng)成
6、像系統(tǒng)(顯微熒光測(cè)鈣)。
結(jié)果:在細(xì)胞外鈣為1.8mmol/L的靜息條件下,應(yīng)用50μmol/LSAA,各時(shí)間點(diǎn)的F/F0和靜止?fàn)顟B(tài)的F/F0相比無明顯變化(n=3,P>0.05);在細(xì)胞外鈣濃度為0的條件下,應(yīng)用50μmol/LSAA后,各時(shí)間點(diǎn)的F/F0和靜止?fàn)顟B(tài)的F/F0相比無明顯變化(n=3,P>0.05);應(yīng)用50μmol/LSAA后可抑制KC1去極化所引起的心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高的幅度,SAA組雖然可見F/F
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