丹酚酸A干預(yù)心肌缺血再灌注損傷的鈣相關(guān)機制研究.pdf

1、丹酚酸A(SAA)是唇型科植物丹參的水溶性部分丹酚酸中的主要化學(xué)成分之一,由一分子丹酚素和三分子咖啡酸縮合而成。本實驗室課題組最近研究發(fā)現(xiàn)SAA具有抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞LDH漏出的作用,這為SAA發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷作用提供了細(xì)胞水平上的依據(jù)。本課題為闡明它這一保護作用的機制,首先通過建立體外缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞模型來模擬心肌缺血再灌注損傷并應(yīng)用MTT實驗的方式,觀察了SAA對心肌細(xì)胞活力的保護作用。盡管L-型鈣通道的大量開放是造成

2、鈣超載的重要因為,但丹酚酸A對心肌細(xì)胞L-型鈣通道的影響作用至今未見報道,因此實驗部分二采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)來研究SAA對心肌細(xì)胞L-型鈣通道電流及其動力學(xué)過程的影響作用,與此同時我們還應(yīng)用活細(xì)胞自動成像系統(tǒng)來驗證了SAA對心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響作用,進一步探索其抗心肌缺血再灌注損傷作用的鈣離子機制。
　　 實驗部分一丹酚酸A對缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞活力的影響
　　 目的研究丹酚酸A對缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞活力的影響
　　

3、 方法： SynergyTM4多功能微孔板檢測系統(tǒng)測定OD值。
　　 結(jié)果：與正常組比較,模型組心肌細(xì)胞OD值明顯降低(P<0.001)；與模型組比較,SAA各劑量組心肌細(xì)胞的OD值明顯增高(P<0.001)；SAA高中低劑量組心肌細(xì)胞OD值分別為(0.439±0.007)、(0.395±0.008)、(0.367±0.019)。
　　 結(jié)論： SAA可濃度依賴性的對抗缺氧復(fù)氧損傷維持細(xì)胞活力。
　　 實驗部分

4、二丹酚酸A對大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道的阻滯作用
　　 目的研究丹酚酸A對大鼠心肌細(xì)胞鈣通道的影響作用。
　　 方法：全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)。
　　 結(jié)果：丹酚酸A濃度依賴性的阻斷I-CaL,SAA10-6,10-5,10-4,10-3mol/L對I-CaL峰電流的抑制率分別為(16.23±1.3)％(n=6,p<0.05),(22.9±3.6)％(n=6,p<0.05),(53.4±3.0)％(n=8,p<0.01),

5、(62.26±2.9)％(n=6,p<0.01),其IC50為3.83x10-5Smol/L；SAA10-5,10-4mol/L,能使I-V曲線明顯上移,激活曲線明顯右移,但不改變失活、恢復(fù)曲線的形狀。
　　 結(jié)論：丹酚酸A可濃度依賴性的阻斷心肌細(xì)胞鈣通道電流。
　　 實驗部分三丹酚酸A對心肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響
　　 目的研究丹酚酸A對大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響作用。
　　 方法：活細(xì)胞自動成

6、像系統(tǒng)(顯微熒光測鈣)。
　　 結(jié)果：在細(xì)胞外鈣為1.8mmol/L的靜息條件下,應(yīng)用50μmol/LSAA,各時間點的F/F0和靜止?fàn)顟B(tài)的F/F0相比無明顯變化(n=3,P>0.05)；在細(xì)胞外鈣濃度為0的條件下,應(yīng)用50μmol/LSAA后,各時間點的F/F0和靜止?fàn)顟B(tài)的F/F0相比無明顯變化(n=3,P>0.05)；應(yīng)用50μmol/LSAA后可抑制KC1去極化所引起的心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高的幅度,SAA組雖然可見F/F