黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
　　 碩士研究生：杜盛陽(yáng)
　　 導(dǎo)師：吳學(xué)建
　　 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科
　　 河南鄭州450052
　　 摘要
　　 目的
　　 研究原代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UCMSCs)的生物學(xué)特性及其體外向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的條件，為組織化人工神經(jīng)的制備提供干細(xì)胞資源。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)中我們通過(guò)在無(wú)

2、菌條件下取正常足月剖腹產(chǎn)新生兒的臍帶，利用組織塊培養(yǎng)法獲得貼壁細(xì)胞并進(jìn)行傳代培養(yǎng)和純化。取第2代貼壁細(xì)胞，免疫組化測(cè)定細(xì)胞表面CD44、CD105、CD106、CD34、CD45表達(dá)情況。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的UCMSCs進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞生長(zhǎng)至60％-70％融合時(shí)分為四組進(jìn)行誘導(dǎo)分化。四組細(xì)胞分別加入單純培養(yǎng)液空白對(duì)照組(A組)、單純生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)組（B組）、單純黃芪誘導(dǎo)組(C組)和黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)液(D組)，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)并檢

3、測(cè)其表面神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)志物如NSE、NF和GFAP的陽(yáng)性表達(dá)率，將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.原代培養(yǎng)的組織塊在5-6d后可見(jiàn)新生貼壁的細(xì)胞，形態(tài)類似成纖維細(xì)胞，一周后快速增殖，成漩渦狀聚集，在生長(zhǎng)的過(guò)程中呈現(xiàn)問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)，免疫組化檢測(cè)表面標(biāo)記CD44、CD105強(qiáng)陽(yáng)性，CD106弱陽(yáng)性，CD34、CD45陰性，檢測(cè)結(jié)果和UCMSCs的生物學(xué)特征符合。
　　 2.單純bFGF、單純黃芪和

4、黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子都可以將細(xì)胞誘導(dǎo)向神經(jīng)樣細(xì)胞分化，但是通過(guò)誘導(dǎo)后細(xì)胞表面神經(jīng)標(biāo)志物的測(cè)定，黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)組的細(xì)胞NSE、NF和GFAP的陽(yáng)性表達(dá)率也更高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩者的差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.中藥黃芪聯(lián)合生長(zhǎng)因子可明顯促進(jìn)人UCMSCs分化為神經(jīng)樣細(xì)胞，不僅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，而且從分子生物學(xué)水平表現(xiàn)出神經(jīng)細(xì)胞特征。
　　 2.與單純生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)組（B組）和單純黃芪誘導(dǎo)組