促紅細胞生成素預處理對缺血性急性腎衰竭的保護作用及機制.pdf

1、目的:
　　 研究重組人促紅細胞生成素預處理對缺血性急性腎衰竭的保護作用并探討其可能的作用機制。
　　 方法:
　　 通過缺血再灌注損傷法建立在體大鼠缺血性急性腎衰竭模型,雄性成年SD大鼠48只隨機分為4組,每組12只,缺血前及再灌注后各6只。假手術組大鼠單純切除右腎,未行左腎缺血再灌注；缺血組大鼠行右腎切除,左腎缺血45 min再灌注24 h；促紅素組大鼠亦單純切除右腎,于術前24 h腹腔注射重組人促紅細胞生成

2、素3000U/kg,但未行左腎缺血再灌注；促紅素缺血組大鼠于缺血前24 h腹腔注射重組人促紅細胞生成素3000U/kg,行右腎切除,左腎缺血45 min再灌注24 h。假手術組及缺血組分別于術前24 h以生理鹽水1.5 ml/kg腹腔注射。分別于缺血前及再灌注后測定血肌酐和尿素氮值,用HE染色及paller法腎小管評分觀察腎組織損傷形態(tài)學改變,采用TUNEL法檢測腎小管上皮細胞凋亡。分別于大鼠腎缺血前、缺血再灌注后取腎組織標本,采用We

3、stern blot法半定量分析促紅細胞生成素對缺血性急性腎衰竭大鼠腎組織中抗凋亡因子Bcl-2及半胱天冬蛋白酶Caspase-3的蛋白表達的影響。
　　 結果:
　　 腎功能結果:與假手術組(Scr52.38±6.68,BUN4.71±0.93)比較,再灌注后缺血組(Scr353.20±34.34,BUN41.25±4.10)、促紅素缺血組(Scr251.80±37.66,BUN25.67±3.10)血肌酐、尿素氮明顯

4、升高(P<0.05)；與缺血組(Scr353.20±34.34,BUN41.25±4.10)比較,促紅素缺血組(Scr251.80±37.66,BUN25.67±3.10)血肌酐、尿素氮水平下降(P<0.05)。缺血前各組血肌酐、尿素氮差異無統(tǒng)計學意義。
　　 腎組織形態(tài)學結果:與假手術組(19.33±3.33)比較,缺血組(250.67±23.96)及促紅素缺血組(135.33±11.69)腎小管損傷明顯、腎小管paller評

5、分升高(P<0.05)；與缺血組(250.67±23.96)比較,促紅素缺血組(135.33±11.69)腎小管損傷減輕、腎小管paller評分下降(P<0.05)。
　　 TUNEL染色結果:與假手術組[(1.17±0.48)％]比較,缺血組[(24.58±4.39)％]及促紅素缺血組[(8.52±2.06)％]TUNEL凋亡指數(shù)增加(P<0.05)；與缺血組[(24.58±4.39)％]比較,促紅素缺血組[(8.52±2.0

6、6)％]TUNEL凋亡指數(shù)下降(P<0.05)。
　　 缺血前各組Western blot結果:與假手術組(55.17±7.76)比較,促紅素組(135.00±9.89)及促紅素缺血組(133.05±8.78)Bcl-2蛋白表達上調(diào)(P<0.05),各組Caspase-3蛋白表達在缺血前差異無統(tǒng)計學意義。
　　 再灌注后各組Western blot結果:與假手術組(Bcl-2,52.93±7.13,Caspase-3,1

7、8.53±1.86)比較,缺血組(28.12±6.49)Bcl-2蛋白表達下調(diào)(P<0.05),促紅素組(133.08±8.92)、促紅素缺血組(86.00±7.99)Bcl-2蛋白表達上調(diào)(P<0.05),缺血組(55.62±2.90)、促紅素缺血組(45.77±2.08)Caspase-3蛋白表達上調(diào)(P<0.05)；與缺血組(Bcl-2,28.12±k6.49,Caspase-3,55.62±2.90)比較,促紅素缺血組Bcl-2

8、蛋白(86.00±7.99)表達上調(diào),Caspase-3蛋白(45.77±2.08)表達下調(diào)(P<0.05)。
　　 各組缺血前與再灌注后Western blot結果:與缺血前比較,缺血組、促紅素缺血組缺血再灌注后Bel-2蛋白表達下調(diào)(P<0.05),假手術組、促紅素組缺血再灌注前后Bcl-2蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義；缺血組、促紅素缺血組再灌注后Caspase-3蛋白表達上調(diào)(P<0.05),假手術組、促紅素組缺血再灌注前后C