高糖毒性對胰島α細胞分泌功能的影響及其機制探討.pdf

1、第一部分： 目的：探討慢性葡萄糖毒性對α細胞胰高糖素分泌的影響及α細胞胰島素抵抗對其影響。 方法：胰島細胞和TCl—6細胞(α細胞株)分別培養(yǎng)于含低濃度(5.5mM)、中濃度(11.1mM)和高濃度(25mM)葡萄糖的培養(yǎng)基中1，3，5d，分別檢測胰高糖素(Glc)分泌及其mRNA表達；加入不同濃度胰島素6h后，觀察對培養(yǎng)5d的原代胰島和TCl—6細胞Glc分泌和基因表達的影響并用Western Blot方法檢測高糖對α

2、細胞Akt磷酸化的影響。 結(jié)果： (1)培養(yǎng)1d時，低、中和高濃度葡萄糖培養(yǎng)的原代胰島細胞和TCl—6細胞Glc分泌沒有顯著差別，培養(yǎng)3d時，高糖培養(yǎng)的胰島細胞胰高糖素分泌明顯增加42％[(2252.64±41.71)pg/mg protein vs(3205.97±45.53)pg/mgprotein，P<0.05)]，而TCl—6細胞胰高糖素的分泌無明顯變化，試驗第5d，中濃度和高糖培養(yǎng)的原代胰島細胞胰高糖素均較低糖

3、培養(yǎng)明顯升高，分別增加52％((2452.22±67.89)pg/mg protein vs(3735.44±54.89)pg/mg protein，P<0.05)和117％[(2452.22±67.89)pg/mg protein vs(5320.20±398.51)pg/mg protein，P<0.05)]，而TCl—6細胞僅在高糖培養(yǎng)5d時胰高糖素分泌較低糖培養(yǎng)明顯增加，為74％((78.62±4.72)ng/106 prote

4、in vs(136.8±10.94)ng/106 protein，P<0.05)。 (2)與低糖培養(yǎng)1d相比，中、高濃度葡萄糖培養(yǎng)1d的原代胰島細胞和TCl—6細胞Glc基因表達沒有明顯差別，但培養(yǎng)3d后，高糖培養(yǎng)的胰島細胞胰高糖素基因表達較低糖培養(yǎng)升高125％(P<0.05)，而TCl—6細胞胰高糖素基因表達此時沒有明顯變化；當培養(yǎng)5d時，25mM糖濃度培養(yǎng)的原代胰島和TCl—6細胞Glc基因表達明顯升高，比低糖培養(yǎng)分別增高2

5、72％和78％； (3)10-7M胰島素可以抑制低糖培養(yǎng)的原代胰島和TCl—6細胞Glc的分泌，分別為60％((2315.02±48.12)pg/mg protein vs(915.99±32.54)pg/mg protein；P<0.05)和61％[(55.12±3.86)ng/106 protein vs(21.59±1.30)ng/106 protein，P<0.05]，但僅能輕微抑制高糖培養(yǎng)下原代胰島和TCl—6細胞Gl

6、c的分泌；當胰島素增至10-5M時，高糖培養(yǎng)下原代胰島和TCl—6細胞的Glc的分泌也明顯受到抑制，分別為66％[(3872.34±29.66)pg/mg protein vs(1307.65±23.34)pg/mg protein；P<0.05]和61％[(118.61±10.68)ng/106 protein vs(46.55±3.72)ng/106 protein； (4)加入10-5M胰島素2h后，高糖和低糖培養(yǎng)下原代胰

7、島和TCl—6細胞P—Akt水平分別升高137％和70％以及200％和180％，但高糖組明顯低于低糖組，給予PI3K抑制劑—wortmannin，低糖培養(yǎng)的原代胰島和TCl—6細胞P—Akt水平抑制率明顯高于高糖組。 結(jié)論：高糖可以引發(fā)原代胰島和TCl—6細胞胰高糖素的分泌升高，其可能的機制與原代胰島和TCl—6細胞胰島素介導(dǎo)的PI3K/Akt信號通路受阻而產(chǎn)生的原代胰島和TCl—6細胞保留有關(guān)。 第二部分： 目

8、的：探討逆轉(zhuǎn)高糖毒性對α細胞胰高糖素分泌和合成的影響以及可能的機制。 方法：TCl—6細胞(α細胞株)分別給予5.5mmol/L(低糖組)和25mmol/L(高糖組)葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)10d，25mmol/L葡萄糖培養(yǎng)5d/5.5mmol/L葡萄糖培養(yǎng)5d(高糖—低糖組)以及5.5mmol/L葡萄糖培養(yǎng)5d/25mmol/L葡萄糖培養(yǎng)5d(低糖—高糖組)，檢測各組細胞胰高糖素分泌及其mRNA的表達；Western印跡檢測持續(xù)高糖

9、以及由高糖降至低糖后TCl—6細胞Snare蛋白(syntaxin1A和SNAP—25)的表達水平； 結(jié)果：(1)與高糖組TCl—6細胞相比，高糖—低糖組TCl—6細胞Glc分泌下降29％[(2.68±0.21)ng/mg protein vs(3.74±2.99)ng/mg protein，P<0.05]；(2)與高糖組TCl—6細胞相比，高糖—低糖組TCl—6細胞GlcmRNA表達下降52.6％±2.8％(P<0.05)；(