日本血吸蟲ARG和p50 IP基因的克隆及其結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf

1、研究目的擴(kuò)增Sj ARG和Sj p50 IP基因全長(zhǎng)的cDNA和DNA序列,分析cDNA和DNA序列之間的不同,擴(kuò)增ARG基因的啟動(dòng)子序列,實(shí)驗(yàn)鑒定ARG基因序列的完整性;研究重組蛋白ARG和p50 IP的生物學(xué)活性,包括免疫原性、免疫反應(yīng)性,組織分布及酶活性等;以Sj 26 GST為陽性對(duì)照,研究ARG和p50 IP等作為疫苗的保護(hù)性效果及可能機(jī)制.結(jié)論[1]識(shí)別并擴(kuò)增得到了SjARG和Sjp50 IP二個(gè)基因的全長(zhǎng)DNA和cDNA序

2、列:SjARG基因cDNA序列全長(zhǎng)編碼區(qū)為1164bp,其DNA序列無內(nèi)含子,其起始密碼子前-32位為TATA盒;Sjp50 IP基因cDNA序列全長(zhǎng)編碼區(qū)為1275bp,其DNA編碼區(qū)序列中有六個(gè)內(nèi)含子,DNA序列全長(zhǎng)1486bp.[2]發(fā)現(xiàn)純化的Sj ARG重組蛋白具有與Sj天然蛋白相同的免疫原性和免疫反應(yīng)性;免疫組化顯示ARG定位于日本血吸蟲成蟲的生殖器、腸管;酶學(xué)分析顯示,重組ARG具有酶的活性,在37℃、pH9.5時(shí),酶活性單

3、位為35.47 U/mg,Km值為8.465×10-3mol/L;動(dòng)物免疫效果顯示,SjARG具有比GST更好的減蟲和減卵效果,特別是SjARG先DNA免疫再蛋白質(zhì)免疫組,其減蟲率、減卵率高達(dá)63.9％、97.9%,可能是理想的疫苗候選分子.[3]發(fā)現(xiàn)純化的Sj p50 IP重組蛋白具有與Sj天然蛋白相同的免疫原性和免疫反應(yīng)性;免疫組化顯示p50 IP定位于日本血吸蟲成蟲的皮層;動(dòng)物免疫效果顯示,p50 IP各組也顯示了較高的減蟲、減卵