骨髓干細(xì)胞移植治療擴(kuò)張型心肌病的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、目的：評(píng)價(jià)骨髓干細(xì)胞移植治療擴(kuò)張型心肌病(DCM)并發(fā)心力衰竭的效果、可行性、安全性和途徑，并探討其作用機(jī)制。 方法： 1.基礎(chǔ)研究：(1)SD大鼠經(jīng)腹腔注射阿霉素(2mg/Kg/周×8周)，建立大鼠阿霉素性心肌病模型，然后隨機(jī)分為三組：DCM空白組(B組)、靜脈移植組(C組)和靜脈對(duì)照組(D組)，另設(shè)正常對(duì)照組(A組)。(2)通過(guò)全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)、擴(kuò)增獲得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，在移植前用4，6-聯(lián)脒-苯基吲哚(

2、DAPI)標(biāo)記MSCs。(3)分別經(jīng)尾靜脈注射MSCs和培養(yǎng)基至C組和D組大鼠，A組和B組大鼠不干預(yù)。(4)于移植前和移植后8周心臟彩超觀察左室舒張末徑(LVDD)、左室射血分?jǐn)?shù)(INEF)，多導(dǎo)生理記錄儀觀察左室最大壓力上升速率(+LVdp/dtmax)、左室最大壓力下降速率(-LVdp/dtmax)，并分析組織病理學(xué)特征。(5)放免法檢測(cè)c組和D組大鼠移植后血清和血漿中腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和心鈉

3、素(ANP)濃度以及免疫組化法檢測(cè)心肌組織Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平，與A、B組對(duì)照。 2.臨床研究：將27例擴(kuò)張型心肌病患者(心功能NYHAIII-Ⅳ級(jí))隨機(jī)分為18例移植組和9例對(duì)照組，抽取移植組骨髓液40~50ml分離獲取骨髓單個(gè)核細(xì)胞注入冠狀動(dòng)脈，于移植前、移植后3月、6月心臟超聲隨訪LVDD、LVEF、肺動(dòng)脈壓力。 結(jié)果： 1.基礎(chǔ)研究：(1)大鼠阿霉素心肌病模型LVDD增大[(7.17±0.35)

4、比(6.73±0.35)mm，P<0.05]，LVEF下降[(0.83±0.02)比(0.91±0.01)，P<0.05)；組織病理學(xué)檢查符合擴(kuò)張型心肌病典型病理特征。(2)原代MSCs呈集落生長(zhǎng)，傳代至3-4代時(shí)DAPI標(biāo)記率幾乎100％用于移植。(3)細(xì)胞移植后8周，C組LVEF較移植前升高明顯[(0.86±0.01)比(0.82±0.03)，P<0.05]，高于B組[(0.86±0.01)比(0.82±0.01)，P<0.05]和

5、D組[(0.86±0.01)比(0.82±0.02)，P<0.05]；LVDD較移植前稍下降[(7.07±0.17)比(7.18±0.33)mm，P>0.05]，稍低于B組[(7.07±0.17)比(7.21±0.32)mm，P>0.05]和D組[(7.07±0.17)比(7.23±0.31)mm，P>0.05]；+LVdp/dtmax明顯高于B組[(4843.7±711.2)比(3272.3±1064.3)mmHg/s，P<0.05]

6、，也顯著高D組[(4843.7±711.2)比(3312.2±800.7)mmHg/s，P<0.05]；-LVdp/dtmax明顯高于B組[(-3007.5±464.6)比(-2025.4±566.4)mmHg/s，P<0.05]和D組[(-3007.5±464.6)比(-2289.7±836.4)mmHg/s，P<0.05]；C組心肌中可見帶有藍(lán)色熒光的DAPI標(biāo)記的骨髓MSCs，心肌膠原纖維增生較B組和D組減少，心肌膠原容積百分比低

7、于B組[(14.40±0.67)比(25.39±0.65)，P<0.05]和D組[(14.40±0.67)比(26.94±1.03)，P<0.05]，毛細(xì)血管計(jì)數(shù)高于B組[(4.30±0.40)比(2.53±0.35)，P<0.05] 和D組[(4.30±0.40)比(2.57±0.34)，P<0.05]。(4)移植后8周C組血清TNF-α濃度低于B組[(14.79±1.49)比(21.82±2.69)fmol/ml ，P<0.05]