E3泛素連接酶Znrf1對急性白血病細胞NB4干性的影響.pdf

1、目的：E3泛素連接酶的突變和異常表達在惡性血液系統(tǒng)疾病中起重要作用，Znrf1基因是一種新發(fā)現(xiàn)的E3泛素連接酶，其在白血病中的作用研究甚少。本研究通過觀察沉默及過表達Znrf1對急性早幼粒細胞系NB4腫瘤干細胞干性，細胞增殖以及凋亡的影響，來研究Znrf1基因在白血病細胞系NB4中的作用，從而進一步探討Znrf1在白血病發(fā)生及發(fā)展中的意義。
　　方法：本研究中，用電轉(zhuǎn)染的方法將Znrf1基因的siRNA以及其過表達質(zhì)粒NM-032

2、268瞬轉(zhuǎn)入NB4細胞，利用CFSE染色檢測轉(zhuǎn)染后不同時間點細胞增殖，通過AnnexinV-FITC/PI的方法來檢測轉(zhuǎn)染后細胞凋亡，通過流式檢測細胞ALDH陽性率來闡明白血病細胞干性的變化。在此基礎(chǔ)上，通過Western Blot檢測AKT、P-AKT以及STAT-5表達水平的變化，探討Znrf1影響白血病細胞干性的可能機制。
　　結(jié)果：篩選出NB4細胞的最佳電轉(zhuǎn)條件后。CFSE法檢測細胞增殖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：過表達Znrf1基因48

3、H、72H均能夠使其細胞增殖速度較對照組明顯減慢，而沉默Znrf1后，實驗組與對照組細胞的增殖速度無明顯差別。流式檢測結(jié)果說明：過表達Znrf1基因后48H的凋亡率較對照組明顯增加，而沉默Znrf1基因后，其凋亡率與對照組相比在24H、48H均無明顯差異。流式檢測結(jié)果說明：過表達Znrf1基因后的NB4細胞中ALDH陽性率較對照組降低，表明上調(diào)Znrf1能夠抑制其白血病細胞干性。Western Blot檢測上調(diào)Znrf1基因后AKT以及

4、STAT-5的動態(tài)變化水平。發(fā)現(xiàn)過表達Znrf1基因48H后，實驗組的AKT、P-AKT及STAT-5的表達量較對照組低。而沉默Znrf1基因48H后，AKT的表達量較對照組無明顯差異。
　　結(jié)論：（1）過表達Znrf1基因可以抑制白血病細胞干性，降低白血病干細胞池，抑制急性早幼粒白血病細胞NB4的增殖，使白血病細胞的凋亡率增加。
　?。?）Znrf1降低AKT、P-AKT及STAT-5表達，這可能是Znrf1影響NB4白血