海藻酸鈉微囊包覆HEK293細(xì)胞緩釋lefty用于腫瘤逆轉(zhuǎn)治療的研究.pdf

1、近年來的研究表明，胚胎組織的微環(huán)境可通過表觀遺傳學(xué)機(jī)制使腫瘤細(xì)胞逆向轉(zhuǎn)化為表型正常的細(xì)胞，nodal信號蛋白的抑制因子lefty在該過程中發(fā)揮了十分關(guān)鍵的作用。由于lefty可以逆轉(zhuǎn)腫瘤的表型而對正常的細(xì)胞沒有影響，這一發(fā)現(xiàn)為腫瘤的逆轉(zhuǎn)治療提供了新的分子治療靶點(diǎn)。但lefty主要在胚胎干細(xì)胞中高水平表達(dá)，在正常的組織和腫瘤組織中呈低水平表達(dá)。目前原核生物的表達(dá)系統(tǒng)制備的基因重組蛋白由于缺乏糖基化修飾藥效很低，采用真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)面臨蛋白

2、產(chǎn)量較低、造價(jià)昂貴和臨床使用不便的缺點(diǎn)。因此，如何將lefty用于腫瘤細(xì)胞的治療是本課題主要解決的問題。本研究提出采用細(xì)胞微囊化技術(shù)局部緩釋lefty實(shí)現(xiàn)對腫瘤進(jìn)行逆轉(zhuǎn)化治療的設(shè)想。本研究首先構(gòu)建了pCDNA3.1-LEFTY1和pIRES-GFP-LEFTY2重組體質(zhì)粒,然后通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá) lefty蛋白的HEK293-pIRES-GFP-LEFTY2和HEK293-pCDNA3.1-LEFTY1細(xì)胞株，構(gòu)建的pIRE

3、S-GFP雙表達(dá)表達(dá)系統(tǒng)能夠有效的監(jiān)控lefty2的表達(dá)效率。采用western blot檢測lefty1和lefty2蛋白能夠分泌到培養(yǎng)基中。
　　鑒于海藻酸鈉高分子缺乏細(xì)胞粘附分子，本研究通過明膠改性，制備了明膠-海藻酸鈉復(fù)合微囊，使得HEK293細(xì)胞在微囊內(nèi)的存活得到改善。本課題還自制了高壓靜電微囊發(fā)生器一臺，利用該設(shè)備可以成功的將微囊的直徑控制在100μm左右。
　　通過細(xì)胞微囊化技術(shù)將穩(wěn)定表達(dá)lefty蛋白的HEK