穩(wěn)定表達(dá)HPPE基因的HEK293細(xì)胞對(duì)骨癌痛大鼠鎮(zhèn)痛作用及對(duì)PKCγ的影響.pdf

1、目的：建立大鼠骨癌痛模型并鞘內(nèi)置管，觀察鞘內(nèi)注射穩(wěn)定表達(dá)人前腦啡肽原(HPPE)基因的HEK293細(xì)胞(Plv-Ubc-HPPE/HEK293)對(duì)骨癌痛大鼠痛覺的影響，探討其與脊髓背角蛋白激酶Cγ（PKCγ）表達(dá)的關(guān)系。
　　 方法：選取40只健康雌性SD大鼠（體重180-200克），隨機(jī)分為4組(n=10):Naive組（空白對(duì)照，大鼠不做任何處理），BCP組（大鼠左側(cè)脛骨行骨癌痛造模手術(shù)，鞘內(nèi)不注入藥物），BCP+HEK29

2、3組（大鼠左側(cè)脛骨行骨癌痛造模手術(shù)，鞘內(nèi)注入U(xiǎn)bc-GFP-L.V/HEK293細(xì)胞），BCP+HPPE組（大鼠左側(cè)脛骨行骨癌痛造模手術(shù)，鞘內(nèi)注入Plv-Ubc-HPPE/HEK293細(xì)胞）。對(duì)造模成功大鼠進(jìn)行鞘內(nèi)穿刺并留置導(dǎo)管。術(shù)后第14天開始分別對(duì)BCP+HEK293組和BCP+HPPE組大鼠鞘內(nèi)注射Ubc-GFP-L.V/HEK293細(xì)胞懸液和Plv-Ubc-HPPE/HEK293細(xì)胞懸液各10μl，每天一次，連續(xù)四天。術(shù)前1天和

3、從術(shù)后3天開始每隔三天測定各組大鼠的熱刺激縮足反射潛伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)。術(shù)后18天取各組大鼠L4-L6脊髓組織，使用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠脊髓背角PKCγ的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1）在骨癌痛模型制作前，各組大鼠PWTL無顯著差異（P＞0.05）。2）在骨癌痛模型制作第9天開始，疼痛導(dǎo)致大鼠PWTL較術(shù)前顯著降低(P＜0.05)，并持續(xù)下降，與同時(shí)間Naive組比較也有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)差異（P＜0.05）。3）鞘內(nèi)注射細(xì)胞后，BCP+HEK293組大鼠PWTL仍繼續(xù)降低(P＜0.05)，與BCP組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。BCP+HPPE組大鼠PWTL則較BCP組和BCP+HEK293組明顯升高(P＜0.05)。4)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：Naive組大鼠腰膨大處(L4-L6)可見PKCγ少量表達(dá)，且陽性細(xì)胞染色較淺。BCP組和BCP+HEK293組大鼠脊髓背角PKCγ蛋白表達(dá)量較Naive組明顯增加，差別有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。BCP+HPPE組大鼠在鞘內(nèi)注射Plv-Ubc-HPPE/HEK293細(xì)胞后脊髓背角PKCγ的蛋白表達(dá)量顯著降低，與BCP組和BCP+HEK293組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：1）大鼠行為學(xué)表現(xiàn)表明大鼠左側(cè)脛骨骨癌痛模型成功建立。2）大鼠蛛網(wǎng)膜下腔移植穩(wěn)定表達(dá)HPPE基因的Plv-Ubc-HPPE/HEK293細(xì)胞，可以較好的減輕骨癌痛大鼠的行為學(xué)變化，抑制疼痛過敏反應(yīng)，能起到