人血漿脂聯(lián)素亞型分布及其活性檢測.pdf

1、實驗背景：
　　脂聯(lián)素是脂肪細胞合成及分泌的血漿蛋白，以三聚體、六聚體及高分子量聚合體三種形式存在于循環(huán)血液中。基礎(chǔ)研究已經(jīng)證實，脂聯(lián)素具有胰島素增敏、抗炎/血管保護及抗缺血/心肌保護等多重作用。大量臨床數(shù)據(jù)顯示，血漿總脂聯(lián)素含量減少與代謝綜合征、糖尿病及心血管疾病發(fā)生發(fā)展及預后緊密相關(guān)。此外，脂聯(lián)素三種亞型分布改變與噻唑烷二酮類藥物胰島素增敏作用有關(guān)。然而，少數(shù)臨床研究得出了血漿脂聯(lián)素水平與心血管疾病發(fā)病無相關(guān)性，甚至呈正相關(guān)的

2、相反結(jié)果。最近的動物實驗發(fā)現(xiàn)，高脂飲食喂養(yǎng)的肥胖或高脂血癥大鼠血漿脂聯(lián)素含量呈先升高后降低的雙向變化，同時脂聯(lián)素生物學活性下降。該結(jié)果強烈提示我們，僅以血漿總脂聯(lián)素含量為檢測指標，不能全面反應(yīng)脂聯(lián)素與疾病相關(guān)性。因此，檢測血漿總脂聯(lián)素含量、脂聯(lián)素各亞型分布及其活性，才能更全面的反應(yīng)脂聯(lián)素與疾病的關(guān)系。
　　實驗?zāi)康模?br>　　1．測定并分析健康人及2型糖尿病患者血漿總脂聯(lián)素含量及其亞型分布，以確認與疾病關(guān)系最為密切的脂聯(lián)素亞型。

3、
　　2．建立可準確檢測脂聯(lián)素各亞型活性的方法，確認人血漿中最具生物學活性的脂聯(lián)素亞型。
　　實驗方法：
　　1．人血漿脂聯(lián)素含量檢測本實驗入選了174例新診斷的2型糖尿病患者及108例健康對照者；使用ELISA法檢測人血漿中總脂聯(lián)素含量及相關(guān)炎性分子含量，Western blot法檢測人血漿中不同亞型脂聯(lián)素含量。
　　2．人血漿脂聯(lián)素分離純化采用飽和硫酸銨沉淀及陰離子交換層析、凝膠過濾層析分離純化人血漿中不同亞

4、型脂聯(lián)素。
　　3．人血漿各亞型脂聯(lián)素活性檢測用從人血漿中分離純化的三聚體、六聚體及高分子量脂聯(lián)素孵育人臍靜脈內(nèi)皮細胞1小時。用Western blot法檢測人臍靜脈內(nèi)皮中磷酸化磷酸腺苷（AMP）的激活的蛋白激酶（AMPK）的水平。
　　實驗結(jié)果：
　　1.與健康對照組相比較，新診斷的2型糖尿病患者血漿總脂聯(lián)素(P<0.0001)及高分子量脂聯(lián)素(P<0.05)含量明顯減少；六聚體及三聚體脂聯(lián)素含量也減少，但無統(tǒng)計學差

5、異。
　　2.初步從人血漿中分離出各亞型脂聯(lián)素，其中高分子量脂聯(lián)素生物學活性最強。
　　結(jié)論：
　　1．新診斷的2型糖尿病患者總脂聯(lián)素及脂聯(lián)素三種亞型分布改變，高分子量脂聯(lián)素明顯減少，血漿總脂聯(lián)素及脂聯(lián)素亞型分布有望成為預防及診斷糖尿病及心血管疾病的分子標志物。
　　2．初步分離出具有生物學活性的人血漿各亞型脂聯(lián)素，且高聚體脂聯(lián)素激活臍靜脈內(nèi)皮細胞中p-AMPK的活性最強。證實了檢測人血漿中各亞型脂聯(lián)素活性的可行