紅花籽粕中羥基肉桂酰血清素的分離及活性研究.pdf

1、我國的紅花籽資源豐富，紅花籽粕是紅花籽制油時的副產(chǎn)物，一般作為動物飼料，附加值較低。羥基肉桂酰血清素類化合物是紅花籽粕中的活性物質(zhì)，研究表明，羥基肉桂酰血清素具有抗氧化、清除自由基、抑制腫瘤等多種生理功能。本文在前人研究的基礎(chǔ)上，建立紅花籽粕中羥基肉桂酰血清素檢測方法、研究簡單有效的分離純化單體方法及各單體的體外生理活性。 研究中首先建立了分析羥基肉桂酰血清素的反相高效液相色譜方法。羥基肉桂酰血清素四種單體阿魏酰血清素(FS)、

2、N-(p-香豆酰)血清素(CS)、N-(p-香豆酰)色胺β-D-葡萄糖苷(CSG)、N-阿魏酰色胺β-D-葡萄糖苷(FSG)均在50～1800ng/mL呈良好的線性相關(guān)，并在24h內(nèi)有較好的穩(wěn)定性，適用于紅花籽粕中羥基肉桂酰血清素的檢測。 論文重點研究了大孔吸附樹脂對四種單體的富集和純化，以FS、CS為主要研究對象。對16種大孔樹脂的靜態(tài)吸附特性和解吸特征進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：XDA-1樹脂對羥基肉桂酰血清素的吸附率和解吸率較高

3、，適合于分離富集紅花籽羥基肉桂酰血清素。研究了XDA-1樹脂柱層析羥基肉桂酰血清素的動力學(xué)過程，優(yōu)化確定了柱層析純化工藝條件：柱床體積為20mL，CS、FS上樣濃度分別為0.276mg/mL、0.34.6mg/mL，樣品處理量；5倍柱體積，流速：6倍柱體積/時。層析前后CS、FS的含量分別從粗提物的1.63％、2.04％提高到為22.1％和24.7％，CSG和FSG的含量分別從粗提浸膏中的0.29％、0.23％提高到為3.28％和2.3

4、0％。 在XDA-1樹脂層析柱純化基礎(chǔ)上，采用C18層析柱、制備型HPLC層析柱進(jìn)一步分離制備，得到四種羥基肉桂酰血清素單體。經(jīng)HPLC-MS-DAD、1H-NMR、13C-NMR等檢測方法，鑒定四種化合物分別為阿魏酰血清素(FS)、N-(p-香豆酰)血清素(CS)、N-(p-香豆酰)色胺β-D-葡萄糖苷(CSG)、N-阿魏酰色胺β-D-葡萄糖苷(FSG)。 對四種單體進(jìn)行體外清除自由基能力考察，四種單體對DPPH·、O

5、2-、·OH自由基的清除隨其濃度的增加而增強，清除自由基能力強弱次序為CS>FS>FSG>CSG，且CSG、FSG清除自由基能力的濃度依賴關(guān)系遠(yuǎn)弱于FS、CS。體外抗腫瘤試驗結(jié)果表明四種單體對肺癌細(xì)胞H446、肝癌細(xì)胞HepG-2、黑素瘤細(xì)胞B16具有較強的抑制癌細(xì)胞增殖的活性，且有明顯的濃度依賴關(guān)系。其中FS、CS對肝癌細(xì)胞HepG-2的IC50分別為105.0μg/mL、173.2μg/mL；FS比CS有更高的抑制黑素瘤細(xì)胞B16增