髓核樣細胞與溫敏型支架復合培養(yǎng)的探索研究.pdf

1、椎間盤(IntervertebralDisc,IVD)由軟骨終板、髓核以及纖維環(huán)組成，髓核（Nucleuspulposus）是椎間盤結構與功能的核心，包含髓核細胞和細胞外基質。人類椎間盤在生命中“第二個十年”就開始退變，出現細胞凋亡、基質成分改變、纖維環(huán)松弛等病理變化。而椎間盤退變是一系列脊柱退行性疾病發(fā)生的前提和始動環(huán)節(jié)，特別是下腰痛發(fā)生的首要因素。如若可以控制椎間盤退變進程，就可以從一方面防止這些疾病的發(fā)生。組織工程技術是利用種子細

2、胞結合載體、支架材料重建組織器官、修復病變的方法，這一技術的成功應用，可以從根本上解決椎間盤退變的問題。目前多選用間充質干細胞作為種子細胞，在體外以適宜的方法誘導其分化為髓核樣細胞。復合生長因子誘導以及細胞共培養(yǎng)誘導在業(yè)界均有一定研究，但二者對于脂肪干細胞向髓核樣細胞分化的效果有何不同，尚需探索。另外，本實驗把處于軟骨組織工程領域內研究熱點的殼聚糖基可注射支架與誘導后的髓核樣細胞復合，評估其是否具備良好的相容性并維持髓核樣細胞的分化表型

3、、保證正常的細胞外基質分泌，為“可注射支架復合髓核樣細胞微創(chuàng)修復退變椎間盤”這一臨床應用構想進行體外實驗。
　　實驗一選取2月齡新西蘭兔，從肩胛間脂肪組織提取脂肪干細胞并提取髓核細胞，分別進行體外單層培養(yǎng)擴增，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)；脂肪干細胞傳3代后，流式細胞術鑒定細胞表面抗原；將3代脂肪干細胞分為兩組，一組以成髓核誘導培養(yǎng)基誘導分化2周，另一組與髓核細胞在Transwell培養(yǎng)板中共培養(yǎng)2周，比較兩組細胞在蛋白聚糖、Ⅱ型膠原m

4、RNA表達水平上的差異。
　　實驗二以兔脂肪干細胞作為種子細胞，采用實驗一中成髓核誘導培養(yǎng)基誘導為髓核樣細胞；以氯化殼聚糖（C）與β-甘油磷酸鈉（GP）構建溫敏型可注射支架。將細胞與支架混合，37℃成膠后，在成髓核誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)3周，通過AO-PI染色法和掃描電鏡觀測細胞存活情況，PR-PCR檢測蛋白聚糖、Ⅱ型膠原mRNA表達水平。
　　結果證明，生長因子誘導與共培養(yǎng)誘導對細胞在蛋白聚糖、Ⅱ型膠原mRNA表達水平上均無統(tǒng)計