RNA干擾HMGB1表達(dá)在Aβ23-35損傷BV2細(xì)胞中的作用.pdf

1、目的:本研究使用β-淀粉樣蛋白(Aβ)損傷小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞（BV2細(xì)胞）為AD模型，采用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力，同時(shí)運(yùn)用RNA干擾技術(shù)抑制目的基因表達(dá)，探討RNA干擾沉默HMGB1基因在AD模型上的作用，為進(jìn)一步研究HMGB1在AD發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用β-淀粉樣蛋白(Aβ)的活性片段Aβ25-35加入到細(xì)胞中共培養(yǎng)，使用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性來建立AD模型。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將siRNA轉(zhuǎn)到BV2細(xì)胞中，并

2、用Western blot法檢測(cè)HMGB1蛋白的表達(dá)。取對(duì)數(shù)期生長的BV2細(xì)胞分為4組:正常細(xì)胞組（A組）、Aβ25-35模型組（B組）、干擾HMGB1+Aβ25-35損傷組（C組）、溶劑對(duì)照組（D組）。(1)A組不做任何處理;(2)B組加入終濃度為40μmol/L的Aβ25-35(收集細(xì)胞前24h);(3)C組進(jìn)行RNA干擾HMGB1后加入終濃度為40μmol/L的Aβ25-35。(4)D組加入轉(zhuǎn)染試劑和溶解Aβ25-35所需溶劑。孵

3、育72小時(shí)后（Aβ25-35處理24小時(shí)）進(jìn)行Western blot法檢測(cè)HMGB1和NF-κB蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1、Aβ25-35可引起B(yǎng)V2細(xì)胞毒性。相對(duì)于正常組和Aβ25-355、10μmol/L組，Aβ25-3520、30、40μmol/L組細(xì)胞活力下降(P＜0.05)。
　　2、設(shè)計(jì)的三個(gè)序列都能明顯抑制HMGB1的表達(dá)。相比于正常組，三個(gè)序列轉(zhuǎn)染后都能抑制HMGB1的表達(dá)(P＜0.05)，

4、且三個(gè)序列間，正常組和陰性對(duì)照組間HMGB1的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3、RNA干擾HMGB1后，HMGB1和NF-κB表達(dá)下降。C組與A、B、D組相比，HMGB1和NF-κB表達(dá)下降(P＜0.05)，而B組與A組相比，HMGB1和NF-κB表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:Aβ25-35可引起B(yǎng)V2細(xì)胞毒性;RNA干擾HMGB1可成功抑制HMGB1的表達(dá)，在Aβ25-35損傷BV2細(xì)胞中，RNA