MICA基因修飾的口腔鱗癌細胞疫苗誘導抗腫瘤免疫應簽的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 研究MHC-Ⅰ類鏈相關基因A修飾的口腔鱗癌細胞疫苗對免疫重建荷瘤SCID鼠皮下移植瘤生長的抑制作用及誘導機體抗腫瘤免疫應答的有效性，并探討其可能的作用機制。
　　 方法：
　　 密度梯度離心法分離人外周靜脈血淋巴細胞(hu-PBL)，腹腔注射至已用環(huán)磷酰胺抑制骨髓造血功能的SCID鼠，建立人免疫功能重建Hu-PBL/SCID動物模型，人IgG ELISA檢測試劑盒檢測鼠外周血清中人IgG含量以評價重

2、建效果。
　　 60Co放射源致死劑量照射轉染pEGFP-N1-MICA真核表達質(zhì)粒并穩(wěn)定過表達MICA的Tb-pEGFP-N1-MICA細胞，并以轉染空白質(zhì)粒的Tb-pEGFP-N1細胞及未轉染的Tca8113-Tb細胞作為對照，制備滅活腫瘤細胞疫苗，分別腹腔注射接種免疫功能重建Hu-PBL/SCID鼠，共3次。2周后皮下接種Tca8113-Tb細胞，觀察成瘤情況，測量腫瘤體積及重量，計算抑瘤率。
　　 取SCID鼠外

3、周血及脾臟，流式細胞術檢測外周血單個核細胞(PBMC)和脾細胞表面NKG2D的表達，LDH釋放法檢測PBMC和脾細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。
　　 采用SPSS16.0軟件包兩獨立樣本t檢測或方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1.SCID鼠腹腔注射hu-PBL免疫重建1周后，其外周血清中即能檢測到人IgG，且在5周內(nèi)隨時間的延長而升高。
　　 2.接種滅活

4、腫瘤細胞疫苗的Hu-PBL/SCID鼠皮下注射腫瘤細胞后均能順利成瘤，成瘤率100％。但Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組與Tca8113-Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組比較，移植瘤體積與重量均明顯較少(P<0.05)，抑瘤率為63.26％。
　　 3.流式細胞術及LDH釋放法檢測結果顯示Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組Hu-PBL/SCID鼠PBMC和脾細胞表面NKG2D的表達及殺傷活性均顯著高于Tca8113-

5、Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：
　　 1.SCID鼠腹腔注射細胞密度為2.5×108/mL的Hu-PBL0.2mL后，其外周血清中可持續(xù)檢測到人IgG，并隨時間延長而增高，表明成功建立了免疫功能重建的hu-PBL/SCID動物模型。
　　 2.MICA基因修飾的口腔鱗癌細胞疫苗能誘導機體更為強烈的抗腫瘤免疫應答能力，對移植瘤生長具有顯著的抑制作用。其機制可能是