MICA基因修飾的口腔鱗癌細胞疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)簽的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 研究MHC-Ⅰ類鏈相關(guān)基因A修飾的口腔鱗癌細胞疫苗對免疫重建荷瘤SCID鼠皮下移植瘤生長的抑制作用及誘導(dǎo)機體抗腫瘤免疫應(yīng)答的有效性，并探討其可能的作用機制。
　　 方法：
　　 密度梯度離心法分離人外周靜脈血淋巴細胞(hu-PBL)，腹腔注射至已用環(huán)磷酰胺抑制骨髓造血功能的SCID鼠，建立人免疫功能重建Hu-PBL/SCID動物模型，人IgG ELISA檢測試劑盒檢測鼠外周血清中人IgG含量以評價重

2、建效果。
　　 60Co放射源致死劑量照射轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-MICA真核表達質(zhì)粒并穩(wěn)定過表達MICA的Tb-pEGFP-N1-MICA細胞，并以轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的Tb-pEGFP-N1細胞及未轉(zhuǎn)染的Tca8113-Tb細胞作為對照，制備滅活腫瘤細胞疫苗，分別腹腔注射接種免疫功能重建Hu-PBL/SCID鼠，共3次。2周后皮下接種Tca8113-Tb細胞，觀察成瘤情況，測量腫瘤體積及重量，計算抑瘤率。
　　 取SCID鼠外

3、周血及脾臟，流式細胞術(shù)檢測外周血單個核細胞(PBMC)和脾細胞表面NKG2D的表達，LDH釋放法檢測PBMC和脾細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。
　　 采用SPSS16.0軟件包兩獨立樣本t檢測或方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.SCID鼠腹腔注射hu-PBL免疫重建1周后，其外周血清中即能檢測到人IgG，且在5周內(nèi)隨時間的延長而升高。
　　 2.接種滅活

4、腫瘤細胞疫苗的Hu-PBL/SCID鼠皮下注射腫瘤細胞后均能順利成瘤，成瘤率100％。但Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組與Tca8113-Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組比較，移植瘤體積與重量均明顯較少(P<0.05)，抑瘤率為63.26％。
　　 3.流式細胞術(shù)及LDH釋放法檢測結(jié)果顯示Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組Hu-PBL/SCID鼠PBMC和脾細胞表面NKG2D的表達及殺傷活性均顯著高于Tca8113-

5、Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.SCID鼠腹腔注射細胞密度為2.5×108/mL的Hu-PBL0.2mL后，其外周血清中可持續(xù)檢測到人IgG，并隨時間延長而增高，表明成功建立了免疫功能重建的hu-PBL/SCID動物模型。
　　 2.MICA基因修飾的口腔鱗癌細胞疫苗能誘導(dǎo)機體更為強烈的抗腫瘤免疫應(yīng)答能力，對移植瘤生長具有顯著的抑制作用。其機制可能是