降膽固醇菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化及降解產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、根據(jù)生長(zhǎng)量和酶活力兩項(xiàng)指標(biāo),對(duì)初篩獲得的17株同化降解膽固醇的細(xì)菌進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)F-1菌株生長(zhǎng)快,生物量大,酶活性高,因此將其作為出發(fā)菌株進(jìn)行進(jìn)一步的研究.從通氣量,培養(yǎng)溫度,pH,酵母膏,膽固醇和表面活性劑等方面進(jìn)行單因素的優(yōu)化,隨后采用響應(yīng)面法對(duì)培養(yǎng)基的成分進(jìn)一步優(yōu)化,首先用部分重復(fù)因子試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基組分NH<,4>NO<,3>,KH<,2>PO<,4>,MgSO<,4>.7H<,2>O,酵母膏,Tween-80和膽固醇對(duì)產(chǎn)酶量的影響

2、進(jìn)行了評(píng)價(jià),并找出主要的影響因子為酵母膏和Tween-80,前者為正效應(yīng),后者為負(fù)影響,其他組分對(duì)酶活力的影響不顯著.第二步用最陡爬坡路徑逼近最大響應(yīng)區(qū)域.最后用中心組合設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析確定主要影響因子的最佳濃度.預(yù)測(cè)菌株在優(yōu)化培養(yǎng)基的酶活力為1.982×10<'-3>U/ML.通過研究發(fā)現(xiàn)F-1菌株產(chǎn)膽固醇降解酶最佳培養(yǎng)基配方的組成為:NH<,4>NO<,3>1.0g/l;KH<,2>PO<,4> 0.25g/l;MgSO<,4>.7

3、H<,2>O 0.25g/l;FeSO<,4>.7H<,2>O 1mg/l;酵母膏5.694g/l;Tween-80 0.905ml/l,膽固醇1.0g/l.在含有65mL發(fā)酵培養(yǎng)液的三角瓶(250mL)中的最佳發(fā)酵條件為:pH7,28℃,發(fā)酵30h.采用毛細(xì)管氣相色譜法比較優(yōu)化前后膽固醇的降解情況,優(yōu)化前將粗酶液加入到膽固醇反應(yīng)體系中,膽固醇的濃度從99.6258％變?yōu)?6.3830％.優(yōu)化后加入酶,膽固醇的濃度變?yōu)?2％.可以看出菌