環(huán)孢素A下調(diào)腫瘤特異性M2型丙酮酸激酶并抑制乳腺癌細胞的增殖.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院碩士學位論文環(huán)孢素A下調(diào)腫瘤特異性M2型丙酮酸激酶并抑制乳腺癌細胞的增殖姓名：姜凱申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：王青青20091201浙江人學碩1j學位論文中文摘要M2，L和R)，PKM2是一種胚胎表型，它在分化過程中逐步被其他表型代替，但當成熟組織細胞從靜息期重新進入細胞周期時，這些組織特異性丙酮酸激酶(PKMI，PKL，PKR)將被PKM2代替。腫瘤的發(fā)生是體細胞重新進入細胞周期并無限增殖的過程，在這個過程中

2、PKM2大量表達代替原來的丙酮酸激酶正常表型，以維持其自身的高度增殖。研究表明(包括最近Nature上報道)，PKM2在腫瘤的異常代謝及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。PKM2是一種有較好應用價值的腫瘤診斷以及療效預后評價的標志物，也可能成為重要的抗腫瘤藥物的靶點。在本研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)了CsA能顯著下調(diào)乳腺癌細胞中腫瘤特異性M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表達和活性，從而抑制乳腺腫瘤細胞的體外增殖和生長，誘導腫瘤細胞發(fā)生壞死，提

3、示了CsA在乳腺癌的輔助治療中可能具有潛在的應用價值。本研究分為兩部分：第一部分：CsA抑制乳腺癌細胞增殖并誘導細胞壞死用不同濃度CsA(5，lo，15，20ktg／m1)處理乳腺癌細胞株MCF一7，MDAMB435，MDAMB一231和正常乳腺原代細胞，MTT法檢測這些細胞的體外生長，結(jié)果顯示CsA可以劑量和時問依賴方式抑制乳腺癌細胞的體外生長，其抑制效應明顯高于對正常原代乳腺細胞的作用。CsA處理MCF7細胞后，MCF一7中Gl期細

4、胞明顯增多，而進入S期的減少，細胞周期阻滯于Gl期。我們用流式細胞術(shù)檢測AnnexinV和PI標記的CsA處理后的乳腺癌細胞，發(fā)現(xiàn)CsA并不明顯誘導乳腺癌細胞發(fā)生凋亡，主要是直接誘導腫瘤細胞壞死。第二部分：CsA通過下調(diào)乳腺癌細胞PKM2的表達和活性抑制腫瘤細胞的生長我們采用熒光實時定量PCR技術(shù)檢測了丙酮酸激酶在正常乳腺細胞和乳腺癌細胞mRNA表達水平上的差異，用westernblot檢測了PKM2在蛋白水平上的表達。結(jié)果顯示，正常乳