基于適配體特異性作用的乳腺癌細(xì)胞表面多種腫瘤標(biāo)記物同時(shí)檢測(cè)的新方法研究.pdf

1、癌癥是全世界首要的死亡因素，全世界每年有幾百萬(wàn)人死于癌癥疾病。腫瘤疾病的早期診斷是癌癥病人存活的關(guān)鍵因素。腫瘤細(xì)胞表面腫瘤標(biāo)記物的表達(dá)種類(lèi)、表達(dá)水平及其構(gòu)型的變化，是惡性腫瘤早期診斷、分類(lèi)、預(yù)后判斷以及治療的重要指標(biāo)。尤其是腫瘤蛋白的異常表達(dá)與細(xì)胞的惡化和突變緊密關(guān)聯(lián)。對(duì)腫瘤細(xì)胞表面多種腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，不僅能夠大幅提高檢測(cè)的正確率，更有助于闡明腫瘤標(biāo)記物在細(xì)胞癌變過(guò)程中的作用。本論文旨在建立一種針對(duì)乳腺癌細(xì)胞表面多種腫瘤蛋白的熒

2、光檢測(cè)方法，為乳腺癌疾病的臨床診斷提供高靈敏、高準(zhǔn)確性的細(xì)胞水平的檢測(cè)方法。該方法不僅實(shí)現(xiàn)了乳腺癌細(xì)胞表面多腫瘤蛋白的同時(shí)檢測(cè)，還能對(duì)不同類(lèi)型的乳腺癌細(xì)胞加以區(qū)分，在與腫瘤蛋白相關(guān)的癌癥早期診斷中有潛在的應(yīng)用前景。主要內(nèi)容如下:
　　設(shè)計(jì)了一種可激活的適配體探針?lè)肿?，利用其與目標(biāo)蛋白結(jié)合前后熒光信號(hào)的改變實(shí)現(xiàn)了癌細(xì)胞表面多種腫瘤蛋白的同時(shí)檢測(cè)。該探針?lè)肿佑勺R(shí)別序列和修飾序列兩部分組成，其識(shí)別部分為能與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的適配體序列

3、，我們?cè)谄鋬啥朔謩e修飾了完全互補(bǔ)的堿基序列（即修飾序列），使探針?lè)肿颖憩F(xiàn)為莖環(huán)狀，并在其5'端標(biāo)記熒光發(fā)光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。當(dāng)探針?lè)肿优c細(xì)胞作用前，由于熒光發(fā)光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)靠得很近，發(fā)生了熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)而熒光淬滅。因此，探針?lè)肿颖旧韼缀鯔z測(cè)不到熒光信號(hào)。而當(dāng)探針?lè)肿优c細(xì)胞作用后，其莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)被打開(kāi)，造成熒光基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán)，熒光信號(hào)恢復(fù)。我們通過(guò)設(shè)計(jì)不同的可激活適配體探針并對(duì)其分別標(biāo)記熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，實(shí)現(xiàn)了細(xì)

4、胞內(nèi)多種腫瘤相關(guān)蛋白的同時(shí)檢測(cè)。根據(jù)可激活適配體探針熒光信號(hào)的恢復(fù)達(dá)到乳腺癌MCF-7細(xì)胞的高靈敏檢測(cè)，其靈敏度可以低達(dá)每毫升10個(gè)細(xì)胞。該方法的優(yōu)勢(shì)在于所設(shè)計(jì)的可激活的適配體探針有效避免了背景信號(hào)的干擾，大幅度地提高了檢測(cè)的靈敏度?？杉せ畹倪m配體探針不與血液中非目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生作用進(jìn)一步揭示了該探針與目標(biāo)細(xì)胞的特異性結(jié)合。另外，用三種不同的可激活的適配體探針與不同的乳腺癌細(xì)胞作用，通過(guò)檢測(cè)三種腫瘤相關(guān)蛋白在各個(gè)細(xì)胞表面的表達(dá)水平，對(duì)不同型