2，3，7，8-TCDD對(duì)乳腺癌細(xì)胞周期及特異性基因表達(dá)調(diào)控的影響.pdf

1、目的:通過(guò)檢測(cè)2,3,7,8-四氯二苯并-對(duì)-二噁英(tetrachlorodibenzo-p-dioxinTCDD)在體外對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞活力、端粒酶活性、細(xì)胞周期及細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響，為進(jìn)一步探討其毒作用及其機(jī)制提供參考依據(jù)。 方法:常規(guī)培養(yǎng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞。(1)在培養(yǎng)液中分別加入濃度為0，0.03，0.0625，0.125，0.25，0.5，1.0μmol

2、·L-1的2,3,7,8-TCDD作用于MCF-7細(xì)胞24h，用噻唑藍(lán)(MIT)法測(cè)定MCF-7的細(xì)胞活力。(2)用0.5μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用于MCF-7細(xì)胞24,48,72h，裂解MCF-7細(xì)胞，采用BCA方法定量蛋白，端粒酶重復(fù)序列擴(kuò)增-銀染法檢測(cè)端粒酶活性。(3)以0.05μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用MCF-7細(xì)胞24,48,72h，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞周期；SP免疫組

3、化法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1的表達(dá)。(4)負(fù)載鈣離子熒光劑Fluo-3/AM，在激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度變化。 結(jié)論:(1)2,3,7,8-TCDD對(duì)MCF-7細(xì)胞毒性作用存在濃度依賴性，隨濃度增大，細(xì)胞存活率明顯降低；同一濃度下隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞抑制率降低。(2)正常培養(yǎng)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞的端粒酶活性呈陽(yáng)性表達(dá)，經(jīng)2,3,7,8-TCDD作用后，端粒酶活性增強(qiáng)，但隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而降低