Decorin對(duì)SAH后柔腦膜纖維化的干預(yù).pdf

1、目的：蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)是神經(jīng)內(nèi)、外科的常見疾病，慢性腦積水是SAH后的常見慢性并發(fā)癥。柔腦膜是蛛網(wǎng)膜、軟腦膜及兩者之間的蛛網(wǎng)膜下腔的統(tǒng)稱，其蛛網(wǎng)膜細(xì)胞是特化的成纖維細(xì)胞。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和分泌的作用。SAH后腦脊液中的TGF-β1升高，能使柔腦膜的蛛網(wǎng)膜和蛛網(wǎng)膜下腔、以及蛛網(wǎng)膜顆粒等部位的纖維增生，導(dǎo)致慢性腦積水。核心蛋白聚糖(DCN)被認(rèn)為是TGF-β1的天然拮抗劑，具有抗纖維化作用。利

2、用DCN拮抗TGF-β1，減輕柔腦膜的蛛網(wǎng)膜和蛛網(wǎng)膜下腔、以及蛛網(wǎng)膜顆粒等部位的纖維增生，來預(yù)防SAH后慢性腦積水的發(fā)生，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。目前對(duì)此尚無研究報(bào)道，本研究旨在此做初步探索，研究DCN對(duì)SAH后柔腦膜纖維化的干預(yù)。 方法：首先，將80只SD大鼠隨機(jī)分為空白組(20只)、生理鹽水I組(NS I組30只)和模型I組(SAH I組30只)，采用枕大池兩次注血法建立鼠實(shí)驗(yàn)性SAH動(dòng)物模型。分別在第3、6、10、14、21天

3、處死大鼠，在第3天取腦觀察蛛網(wǎng)膜下腔的積血；在所有時(shí)間點(diǎn)均取腦脊液檢測(cè)TGF-β1、PICP的濃度觀察其動(dòng)態(tài)變化；在第21天取腦觀察柔腦膜的纖維化程度。 然后，將40只SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、模型Ⅱ組(SAHⅡ組)、生理鹽水Ⅱ組(NSⅡ組)，每組各10只，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在第2、10天分別給予外源性DCN。在第21天檢測(cè)腦脊液的TGF-β1、PICP濃度和柔腦膜的纖維化程度。 柔腦膜纖維化的檢測(cè)方法包括：膠原纖維M

4、ASSON染色、I型膠原蛋白(Col I)mRNA、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)mRNA的RT-PCR法檢測(cè)及其蛋白的Western blot法檢測(cè)。 結(jié)果： 1、SAH動(dòng)物模型的制作 ①造模第3天，在大腦半球及腦底的蛛網(wǎng)膜下腔(或腦池)可見散在的小血凝塊，切片染色顯示在硬腦膜與腦組織之間柔腦膜內(nèi)可見紅細(xì)胞，構(gòu)模成功； ②SAH I組腦脊液中的TGF-β1較Ns I組明顯升高并呈雙時(shí)相； ③SAH

5、 I組腦脊液中的PICP濃度逐漸升高，第6天開始顯著高于NS I組； ④MASSON染色顯示SAH I組柔腦膜的灰度值顯著低于NSI組、厚度顯著高于NSI組； ⑤SAH I組的col I mRNA、CTGF mRNA及蛋白的表達(dá)量均顯著高于NS I組； ⑥空白組與NS I組間的各指標(biāo)均無顯著性差異。 2、DCN的干預(yù) ①實(shí)驗(yàn)組與SAH Ⅱ組比較：實(shí)驗(yàn)組的TGF-β1稍低但無顯著性、PICP顯著降低

6、；MASSON染色顯示實(shí)驗(yàn)組柔腦膜的厚度稍低但無顯著性、灰度值顯著升高；實(shí)驗(yàn)組Col I mRNA表達(dá)量明顯減少、CTGFmRNA表達(dá)量稍減少但無顯著性；實(shí)驗(yàn)組的Col I和CTGF的表達(dá)量均明顯減少； ②實(shí)驗(yàn)組與NSⅡ組比較：實(shí)驗(yàn)組的TGF-β1、PICP顯著增高；MASSON染色顯示實(shí)驗(yàn)組柔腦膜的厚度明顯增大、灰度值明顯降低；實(shí)驗(yàn)組Col.I mRNA、CTGF mRNA及蛋白的表達(dá)量均明顯增高； ③對(duì)照組與NS Ⅱ