雷帕霉素對蛋白負荷腎病大鼠模型腎臟的影響.pdf

1、目的：觀察雷帕霉素對蛋白負荷腎病大鼠模型腎臟的影響及氯沙坦能否對其有保護作用，并探討相關(guān)機制。 方法：清潔級雌性Wistar大鼠36只隨機分為空白對照組、模型組、雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組。采用向大鼠腹腔注射牛血清白蛋白(BSA)制備蛋白負荷腎病大鼠模型；雷帕霉素組：在模型大鼠基礎上給予雷帕霉素；聯(lián)合用藥組：在模型大鼠基礎上給予雷帕霉素和氯沙坦。檢測各組大鼠的血、尿指標變化，SDS-PAGE電泳分析大鼠尿蛋白成分，同時在光鏡、電鏡下

2、觀察腎組織的病理改變，采用免疫組化、RT-PCR法檢測腎小球足細胞損傷標志物-desmin蛋白以及TGF-β1的表達。 結(jié)果： 1.尿液指標觀察： 1.1各組大鼠尿蛋白定量：實驗第7天，模型組、雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠均出現(xiàn)明顯蛋白尿。雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠24小時尿蛋白量均較模型組大鼠顯著增多(P＜0.05)，但聯(lián)合用藥組大鼠24小時尿蛋白量較雷帕霉素組有明顯緩解(P＜0.05)。實驗第14天，雷帕霉素組

3、大鼠24小時尿蛋白量仍明顯高于模型組(P＜0.05)，而聯(lián)合用藥組與模型組大鼠之間的24小時尿蛋白量無明顯差異(P＞0.05)。 1.2SDS-PAGE電泳分析結(jié)果顯示：收集實驗第7天的尿液進行電泳分析：雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠的大量尿蛋白均以中分子蛋白為主。 2.血生化指標觀察：實驗第8天，各組大鼠的腎功能(血肌酐和血尿素氮)未見明顯差異(P＞0.05)。實驗第15天，雷帕霉素組大鼠的血尿素氮水平顯著高于模型組(P＜

4、0.05)，而聯(lián)合用藥組大鼠的血尿素氮水平較雷帕霉素組降低(P＜0.05)。 3.腎臟組織病理改變： 3.1HE染色：各組大鼠腎小球均未見明顯病理改變，應用雷帕霉素后大鼠腎小管上皮細胞空泡變形多見，刷狀緣脫落多見，腎小管管腔中出現(xiàn)大量蛋白管型，并且較模型組明顯增多。聯(lián)合用藥組大鼠腎小管管腔中蛋白管型較雷帕霉素組大鼠減少。 3.2電鏡：模型組大鼠腎小球毛細血管基底膜結(jié)構(gòu)基本完整，無增厚，偶見足突局灶性融合。雷帕霉素

5、的腎小球足突融合多見，足細胞內(nèi)可見較多電子致密物。聯(lián)合用藥組大鼠電鏡下足細胞改變與雷帕霉素組大鼠相似。 4.免疫組化檢測Oesmin、TGF-β1蛋白表達： 4.1Desmin蛋白：雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠腎小球desmin蛋白表達均明顯高于模型組大鼠(P＜0.05)，雖聯(lián)合用藥組大鼠desmin陽性表達較雷帕霉素組有不同程度地減少，但OD值差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 4.2TGF-β1蛋白：雷帕霉素組

6、和聯(lián)合用藥組大鼠腎小球TGF-β1蛋白表達均明顯高于模型組(P＜0.05)，聯(lián)合用藥組較雷帕霉素組TGF-β1蛋白的表達降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 5.RT-PCR檢測TGF-β1mRNA表達：雷帕霉素組大鼠皮質(zhì)區(qū)TGF-β1mRNA表達較模型組明顯增加，差異有顯著性(P＜0.05)。聯(lián)合用藥組TGF-β1表達較雷帕霉素組減少(P＜0.05)，聯(lián)合用藥組與模型組大鼠間TGF-β1mRNA表達差異無統(tǒng)計學差異。并且各