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1、目的:觀察雷帕霉素對(duì)蛋白負(fù)荷腎病大鼠模型腎臟的影響及氯沙坦能否對(duì)其有保護(hù)作用,并探討相關(guān)機(jī)制。 方法:清潔級(jí)雌性Wistar大鼠36只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組。采用向大鼠腹腔注射牛血清白蛋白(BSA)制備蛋白負(fù)荷腎病大鼠模型;雷帕霉素組:在模型大鼠基礎(chǔ)上給予雷帕霉素;聯(lián)合用藥組:在模型大鼠基礎(chǔ)上給予雷帕霉素和氯沙坦。檢測(cè)各組大鼠的血、尿指標(biāo)變化,SDS-PAGE電泳分析大鼠尿蛋白成分,同時(shí)在光鏡、電鏡下
2、觀察腎組織的病理改變,采用免疫組化、RT-PCR法檢測(cè)腎小球足細(xì)胞損傷標(biāo)志物-desmin蛋白以及TGF-β1的表達(dá)。 結(jié)果: 1.尿液指標(biāo)觀察: 1.1各組大鼠尿蛋白定量:實(shí)驗(yàn)第7天,模型組、雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠均出現(xiàn)明顯蛋白尿。雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠24小時(shí)尿蛋白量均較模型組大鼠顯著增多(P<0.05),但聯(lián)合用藥組大鼠24小時(shí)尿蛋白量較雷帕霉素組有明顯緩解(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)第14天,雷帕霉素組
3、大鼠24小時(shí)尿蛋白量仍明顯高于模型組(P<0.05),而聯(lián)合用藥組與模型組大鼠之間的24小時(shí)尿蛋白量無(wú)明顯差異(P>0.05)。 1.2SDS-PAGE電泳分析結(jié)果顯示:收集實(shí)驗(yàn)第7天的尿液進(jìn)行電泳分析:雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠的大量尿蛋白均以中分子蛋白為主。 2.血生化指標(biāo)觀察:實(shí)驗(yàn)第8天,各組大鼠的腎功能(血肌酐和血尿素氮)未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)第15天,雷帕霉素組大鼠的血尿素氮水平顯著高于模型組(P<
4、0.05),而聯(lián)合用藥組大鼠的血尿素氮水平較雷帕霉素組降低(P<0.05)。 3.腎臟組織病理改變: 3.1HE染色:各組大鼠腎小球均未見(jiàn)明顯病理改變,應(yīng)用雷帕霉素后大鼠腎小管上皮細(xì)胞空泡變形多見(jiàn),刷狀緣脫落多見(jiàn),腎小管管腔中出現(xiàn)大量蛋白管型,并且較模型組明顯增多。聯(lián)合用藥組大鼠腎小管管腔中蛋白管型較雷帕霉素組大鼠減少。 3.2電鏡:模型組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜結(jié)構(gòu)基本完整,無(wú)增厚,偶見(jiàn)足突局灶性融合。雷帕霉素
5、的腎小球足突融合多見(jiàn),足細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)較多電子致密物。聯(lián)合用藥組大鼠電鏡下足細(xì)胞改變與雷帕霉素組大鼠相似。 4.免疫組化檢測(cè)Oesmin、TGF-β1蛋白表達(dá): 4.1Desmin蛋白:雷帕霉素組和聯(lián)合用藥組大鼠腎小球desmin蛋白表達(dá)均明顯高于模型組大鼠(P<0.05),雖聯(lián)合用藥組大鼠desmin陽(yáng)性表達(dá)較雷帕霉素組有不同程度地減少,但OD值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.2TGF-β1蛋白:雷帕霉素組
6、和聯(lián)合用藥組大鼠腎小球TGF-β1蛋白表達(dá)均明顯高于模型組(P<0.05),聯(lián)合用藥組較雷帕霉素組TGF-β1蛋白的表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5.RT-PCR檢測(cè)TGF-β1mRNA表達(dá):雷帕霉素組大鼠皮質(zhì)區(qū)TGF-β1mRNA表達(dá)較模型組明顯增加,差異有顯著性(P<0.05)。聯(lián)合用藥組TGF-β1表達(dá)較雷帕霉素組減少(P<0.05),聯(lián)合用藥組與模型組大鼠間TGF-β1mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。并且各
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