低劑量雷帕霉素對糖尿病腎病大鼠足細胞nephrin及podocin表達的影響.pdf

1、目的：本實驗觀察低劑量雷帕霉素（rapamycin，簡稱RAPA）對糖尿病腎病大鼠血糖、內(nèi)生肌酐清除率、腎重體重比、腎臟病理，以及nephrin和podocin兩種足細胞特異的蛋白分子表達的影響，探討糖尿病腎病蛋白尿的發(fā)病機制，觀察低劑量雷帕霉素能否通過減輕足細胞的損傷而延緩糖尿病大鼠的腎臟損害。
　　 方法：選取24只SD雄性大鼠，體重200-250g，隨機分為正常對照組（C組，n=8）,糖尿病組（n=16）。糖尿病組大鼠禁食

2、12小時后按75mg/kg體重給予1％鏈脲佐菌素（STZ）一次性腹腔內(nèi)注射，正常組大鼠給予等體積檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔內(nèi)注射。注射后72小時尾靜脈取血測血糖，以血糖≥16.7mmol/L為造模成功。造模后第7、14、28天再次測血糖，仍符合上述標準者為穩(wěn)定成模的大鼠，進入后續(xù)實驗，不符合者退出實驗。將穩(wěn)定成模的糖尿病組大鼠按體重隨機分為兩組：糖尿病腎病未治療組（DN未治療組，n=8），糖尿病雷帕霉素干預(yù)組（DN+RAPA組，n=8）

3、。從造模后第五周起DN+RAPA組大鼠每日按1mg/Kg體重給予0.3％雷帕霉素溶液灌胃給藥，C組和DN未治療組以相同體積0.5％羧甲基纖維素溶液灌胃，共干預(yù)8周。實驗結(jié)束時檢測各組大鼠血糖、24小時尿蛋白、體重校正的內(nèi)生肌酐清除率、腎重體重比的變化；HE及PASM染色觀察各組大鼠腎臟的病理改變，透射電鏡觀察腎小球的超微結(jié)構(gòu)改變；通過免疫組化二步法觀察nephrin及podocin在腎組織的定位和表達，并應(yīng)用圖像軟件分析系統(tǒng)對二者的表達

4、進行半定量測定；通過RT-PCR方法半定量分析nephrin和podocin mRNA的表達情況。
　　 結(jié)果：與正常對照組相比，DN未治療組大鼠血糖明顯增高，體重校正的內(nèi)生肌酐清除率、24小時尿蛋白量及腎重體重比均顯著增加（P<0.01），腎臟體積明顯增大，透射電鏡下可見腎小球足細胞足突增寬、部分融合，基底膜節(jié)段性增厚，通過半定量分析提示足細胞nephrin和podocin的蛋白及 mRNA表達均明顯下調(diào)（P<0.01）；DN

5、+RAPA組體重校正的內(nèi)生肌酐清除率及24小時尿蛋白量較DN未治療組明顯降低（P<0.01），HE和PASM染色顯示腎小球肥大、系膜基質(zhì)增生程度較DN未治療組明顯減輕，電鏡下觀察足突增寬、融合現(xiàn)象及基底膜增厚程度均較DN未治療組減輕，免疫組化及RT-PCR半定量分析提示nephrin及podocin的表達較DN未治療組增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　 結(jié)論：nephrin、podocin是構(gòu)成裂孔隔膜（SD）兩種重