肺癌細(xì)胞與其耐藥株間葡萄糖代謝的研究.pdf

1、目的：肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。但由于早期診斷困難，大多患者一經(jīng)確診即為晚期，失去了手術(shù)的機(jī)會，故化療為主的綜合治療是晚期肺癌患者的主要治療手段。但在化療過程中，由于MDR現(xiàn)象的存在，嚴(yán)重影響了臨床化療的效果。為了進(jìn)一步了解腫瘤耐藥的相關(guān)機(jī)制，進(jìn)而可以針對各種復(fù)雜的耐藥腫瘤開發(fā)新的手段逆轉(zhuǎn)耐藥。本實驗通過14 C-葡萄糖代謝測量方法，探討了肺癌細(xì)胞與肺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株間不同葡萄糖代謝通路的差異及DC A對其影響，以期為研

2、究腫瘤細(xì)胞葡萄糖代謝與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1）用Beckman LS6500液體閃爍儀分別檢測不同14C葡萄糖放射性活度下和不同葡萄糖本底濃度下 CO2放射性計數(shù)值的變化。同時用液體閃爍儀分別檢測A549細(xì)胞和G6PD缺陷型A549細(xì)胞以及A549細(xì)胞和線粒體DNA缺失型A549細(xì)胞攝取14C葡萄糖后CO2產(chǎn)生的差異。2）首先采用CCK-8法檢測DCA對A549細(xì)胞及A549/ta xo l細(xì)胞增殖的影

3、響以及這兩株細(xì)胞的紫杉醇耐藥性。再用液體閃爍儀檢測A549細(xì)胞和A549/taxol細(xì)胞攝取14C葡萄糖后CO2的產(chǎn)生、脂質(zhì)的生成和核酸的生成的差異以及DC A對其影響。另外，分別用γ計數(shù)器和乳酸測定試劑盒檢測A549細(xì)胞和A549/taxol細(xì)胞18F-FDG的攝取和乳酸的產(chǎn)生以及DC A對其影響。
　　結(jié)果：1）培養(yǎng)基中葡萄糖本底濃度一定的條件下，CO2放射性計數(shù)值隨著14C葡萄糖放射性活度的增加而增加，兩者之間呈線性。加入的

4、14 C葡萄糖放射性活度一定的條件下，C O2放射性計數(shù)值隨著培養(yǎng)基中葡萄糖本底濃度的增高而降低，兩者之間呈負(fù)指數(shù)變化。同時利用14 C葡萄糖代謝測量方法，有效地檢測出G6PD缺陷型A549細(xì)胞1-14C-葡萄糖釋放的CO2放射性計數(shù)值低于A549細(xì)胞（P<0.01），以及線粒體DNA缺失型A549細(xì)胞6-14C-葡萄糖釋放的CO2放射性計數(shù)值低于A549細(xì)胞（P<0.01）。2）A549/taxol細(xì)胞攝取6-14C-葡萄糖后釋放的C

5、O2放射性計數(shù)值（P<0.01)、18F-FDG的攝取率（P<0.001）和乳酸的生成量(P<0.01)均低于A549細(xì)胞。A549細(xì)胞經(jīng)DCA處理后6-14C-葡萄糖釋放的CO2放射性計數(shù)值升高（P<0.01），而A549/taxol細(xì)胞經(jīng)DCA處理后6-14C-葡萄糖釋放的CO2放射性計數(shù)值無變化。另外，DCA能夠降低A549細(xì)胞和A549/taxol細(xì)胞葡萄糖的攝取率（P<0.001，P<0.01）、脂質(zhì)的生成量(P<0.001，