大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與CBRH-7919肝癌細(xì)胞相互作用的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)對(duì)CBRH-7919肝癌細(xì)胞系增殖和侵襲能力的影響.
  目的:
  探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)對(duì)大鼠CBRH-7919肝癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響。
  方法:
  分離Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),鑒定后進(jìn)行體外培養(yǎng),流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型,制備含有骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)的條件培養(yǎng)基(BMSC-CM),MTT比色法檢測(cè)BMSC-CM對(duì)CBRH

2、-7919肝癌細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSC-CM對(duì)CBRH-7919肝癌細(xì)胞周期的影響,ELISA檢測(cè)BMSC-CM對(duì)CBRH-7919肝癌細(xì)胞分泌AFP的影響,Transwell小室檢測(cè)BMSC-CM對(duì)CBRH-7919肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響。
  結(jié)果:
  1.密度梯度離心法和貼壁細(xì)胞篩選法分離出的大鼠BMSCs,培養(yǎng)的第三代細(xì)胞呈明顯成纖維細(xì)胞狀,排列有一定的方向性,折光性強(qiáng),貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞表型為CD29+

3、CD44+CD34-CD45-。
  2.MTT比色法結(jié)果顯示:25%、50%、75%及100%BMSC-CM組的CBRH-7919肝癌細(xì)胞吸光度值(A值)分別為0.395±0.050、0.459±0.079、0.501±0.084及0.566±0.099,各組顯著高于0%BMSC-CM組(0.277±0.064)(P<0.05),隨著BMSC-CM濃度的增加,A值依次升高,呈濃度依賴性。
  3.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示:25%

4、、50%、75%及100%BMSC-CM組的CBRH-7919肝癌細(xì)胞分裂增殖指數(shù)分別為20.773±1.342、21.838±1.368、23.503±1.568和26.486±2.124,各組顯著高于0%BMSC-CM組(16.653±0.847)(P<0.05),隨著BMSC-CM濃度的增加,細(xì)胞分裂增殖指數(shù)依次升高。
  4.ELISA結(jié)果顯示:25%、50%、75%及100%BMSC-CM組的CBRH-7919肝癌細(xì)胞分

5、泌的AFP值分別為12.562±0.071、14.660±0.106、16.397±0.058及23.196±0.137,均高于0%BMSC-CM組(3.143±0.033)(P<0.05),可以看出隨著BMSC-CM濃度的增加,AFP的量依次升高。
  5.Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:25%、50%、75%和100%BMSC-CM處理后,Transwell小室膜上CBRH-7919肝癌細(xì)胞數(shù)分別為22.000±1.3

6、09、56.750±1.669、70.000±1.309、99.620±1.847,均多于0%BMSC-CM組(9.375±1.061)(P<0.05),隨著BMSC-CM濃度的增加,侵襲能力逐漸增加,呈濃度依賴性。
  結(jié)論:
  1.采用密度梯度離心法和貼壁細(xì)胞篩選法可以成功分離出大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型為CD29+CD44+CD34-CD45-;
  2.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)對(duì)CB

7、RH-7919肝癌細(xì)胞系的增殖和侵襲有一定的促進(jìn)作用。
  第二部分CBRH-7919肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的初步研究
  目的:
  探討CBRH-7919肝癌細(xì)胞是否可以誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)分化為血管內(nèi)皮樣細(xì)胞及其機(jī)制。
  方法:
  應(yīng)用1μm小孔的Transwell小室構(gòu)建BMSCs與CBRH-7919肝癌細(xì)胞的共培養(yǎng)模型,分3組:?jiǎn)为?dú)BMSC組即上

8、層不接種細(xì)胞,僅在下層接種BMSCs,共培養(yǎng)組即上層為CBRH-7919肝癌細(xì)胞,下層接種BMSCs,含有抗VEGF抗體-Avastin的共培養(yǎng)組即在共培養(yǎng)組內(nèi)加入抗VEGF抗體-Avastin,48h和72h后,免疫熒光法檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞VEGFR2和CD31的表達(dá),半固體培養(yǎng)基檢測(cè)BMSCs毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)的形成。
  結(jié)果:
  1.單獨(dú)BMSC組48h和72h時(shí)CD31和VEGFR-2的表達(dá)均陰性,共培養(yǎng)組48h時(shí)

9、BMSC少量表達(dá)CD31和VEGFR2,陽(yáng)性率分別為:(11.50±1.87)%和(12.33±1.37)%,72h時(shí),CD31和VEGFR2表達(dá)明顯增多,陽(yáng)性率分別為:(24.43±2.23)%和(24.86±0.69)%,而含Avastin的共培養(yǎng)組CD31和VEGFR-2表達(dá)一直均陰性。
  2.單獨(dú)BMSC組48h和72h時(shí)均未見毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)形成,共培養(yǎng)組48h時(shí)出現(xiàn)明顯的毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)(8.00±0.05)個(gè)/高倍視野

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