PPARγ激動(dòng)劑對(duì)肥胖小鼠足細(xì)胞AdipoR1的影響.pdf

1、目的：
　　當(dāng)今世界肥胖已經(jīng)成為一種常見(jiàn)的疾病，而肥胖導(dǎo)致的各種并發(fā)癥也成為研究熱點(diǎn)。本文針對(duì)肥胖相關(guān)性腎?。╫besity-related glomerulopathy，ORG）進(jìn)行了相關(guān)研究。旨在通過(guò)對(duì)單純肥胖小鼠在治療過(guò)程中血清ADP和足細(xì)胞AdipoR1的表達(dá)水平，24h尿液中微量白蛋白含量，小鼠腎臟病理等的觀察測(cè)定以及分析對(duì)比，探討不同劑量PPARγ激動(dòng)劑對(duì)于ORG治療的影響，完善和補(bǔ)充PPARγ激動(dòng)劑治療ORG的相關(guān)理

2、論。
　　方法：
　　6周齡雄性ob/ob小鼠24只和其同系C57BL/6J小鼠8只，適應(yīng)性飼養(yǎng)2周。之后按照ob/ob小鼠的體質(zhì)量進(jìn)行隨機(jī)分層，將其分為3組：模型組（M組）、小劑量吡格列酮治療組（T1組）和大劑量吡格列酮治療組（T2組）；余下C57BL/6J小鼠作為肥胖小鼠研究參照對(duì)象（C組）。ob/ob小鼠和C57BL/6J都給予高脂飼料喂養(yǎng)。小鼠用藥通過(guò)灌胃進(jìn)行，其中T1、T2組小鼠給予吡格列酮溶液，劑量分別為2.25

3、 mg·kg-1·d-1和6.65mg·kg-1·d-1，而其余小鼠則使用等體積蒸餾水，每天進(jìn)行一次。開(kāi)始用藥后依據(jù)小鼠體質(zhì)量變化情況調(diào)整吡格列酮用藥劑量，每周進(jìn)行一次，持續(xù)12周。灌胃前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采集小鼠血液標(biāo)本以測(cè)量其血清ADP及血糖，并留尿測(cè)定24小時(shí)尿mALB。12周末用摘眼球法處死小鼠，摘取雙側(cè)腎臟，對(duì)小鼠腎臟進(jìn)行觀察和測(cè)量，包括稱(chēng)量右腎濕重；比較各組小鼠腎臟病理改變的程度（HE染色光鏡觀察），同時(shí)在光鏡下測(cè)量腎小球直徑；足

4、細(xì)胞上ZO-1的表達(dá)水平、WT-1標(biāo)記的足細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及AdipoR1表達(dá)水平的測(cè)定（免疫組化方法測(cè)定）。比較以上測(cè)得的四組小鼠之間腎臟病理指標(biāo)及血清、尿液指標(biāo)之間的差異并對(duì)這些指標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性相關(guān)分析，相關(guān)數(shù)學(xué)分析使用17.0版SPSS軟件進(jìn)行，判定當(dāng)P<0.05時(shí)差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠體質(zhì)量及血糖：6周齡時(shí)ob/ob小鼠（M、T1和T2組）平均體質(zhì)量明顯高于C57BL/6J小鼠（P<0.01），適應(yīng)

5、性飼養(yǎng)2周后，ob/ob小鼠（M、T1和T2組）平均體質(zhì)量超過(guò)正常小鼠（C組）平均體質(zhì)量的50％（＞20%），屬于肥胖小鼠[10]。測(cè)得所有小鼠的血糖值均未超過(guò)16.7mmol/L即小鼠糖尿病標(biāo)準(zhǔn)，在后續(xù)分析中除外糖尿病的影響因素。M組、T1組、T2組小鼠體質(zhì)量之間無(wú)明顯差異（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)得 M組和T1、T2組小鼠體質(zhì)量顯著大于C組（P<0.01），其中，T2組較T1組小鼠體質(zhì)量升高更明顯（P<0.01）。各組小鼠實(shí)驗(yàn)后

6、體質(zhì)量均顯著高于實(shí)驗(yàn)前（P<0.01）。
　　2.小鼠血清ADP：實(shí)驗(yàn)前測(cè)得M組和T1、T2組小鼠較C組的血清ADP明顯降低（P<0.01），而M、 T1、T2三組小鼠之間無(wú)顯著差異（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)后T1、T2組小鼠高于M組小鼠（P<0.01），其中，T2組較T1組升高明顯（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)前后C組小鼠無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　3.小鼠24h尿mALB：實(shí)驗(yàn)前M組和T1、T2組小鼠尿mALB均高于C組小鼠（

7、P<0.01），M組和T1、T2組小鼠尿mALB基本無(wú)差異（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)后T1、T2組小鼠尿mALB明顯低于M組小鼠（P<0.01），其中，T2組明顯低于T1組（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)前后C組小鼠尿mALB無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　4.腎臟組織病理改變：在光鏡下觀察各組小鼠腎臟，C組小鼠腎小球正常無(wú)病變。ob/ob小鼠腎小球鮑曼氏囊增寬，基底膜增厚，系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)增生，基質(zhì)堆積，系膜細(xì)胞，足突細(xì)胞，上皮細(xì)胞內(nèi)有脂

8、類(lèi)的沉積。腎小球體積增大，部分伴有局灶節(jié)段性腎小球硬化，部分足突融合，輕度腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化。其中M組病變最為嚴(yán)重，其次是T1組與T2組。
　　右腎濕重：M組小鼠高于C組（P<0.01），T1、T2組小鼠高于C組小鼠，而低于M組（P<0.01），其中，T2組濕重小于T1組（P<0.05）。
　　腎小球直徑：M組小鼠腎小球直徑大于C組小鼠（P<0.01），T1、T2組小鼠腎小球直徑明顯大于C組小鼠，同時(shí)小于M組小鼠（P<0

9、.01）。其中，T2組與T1組相比較?。≒<0.05）。
　　5.免疫組化結(jié)果：M組小鼠ZO-1表達(dá)水平、足細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、AdipoR1表達(dá)水平均明顯低于C組小鼠（P<0.01），T1、T2組小鼠ZO-1表達(dá)水平、足細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、AdipoR1表達(dá)水平均明顯低于C組小鼠，同時(shí)也明顯高于M組小鼠（P<0.01），其中 T2組與T1組相比明顯升高（P<0.01）。
　　6.線(xiàn)性關(guān)系分析顯示：小鼠血清ADP和體質(zhì)量、右腎濕重、尿mAL

10、B、腎小球直徑呈負(fù)相關(guān)（P<0.001），和ZO-1表達(dá)水平、WT-1標(biāo)記的足細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、AdipoR1表達(dá)水平呈正相關(guān)（P<0.001）。小鼠尿 mALB和體質(zhì)量、右腎濕重、腎小球直徑呈正相關(guān)（P<0.001），和ZO-1表達(dá)水平、WT-1標(biāo)記的足細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、AdipoR1表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.001）。小鼠 AdipoR1表達(dá)水平與 ZO-1表達(dá)水平和WT-1標(biāo)記的足細(xì)胞百分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)（P<0.001），而與體質(zhì)量、腎小球直徑、

11、右腎濕重呈負(fù)相關(guān)（P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　1．肥胖時(shí)血清脂聯(lián)素水平的下降及足細(xì)胞AdipoR1的減少，使足突上Z0-1表達(dá)下降，足細(xì)胞數(shù)目減少及結(jié)構(gòu)破壞，足突融合，引起腎臟損害。
　　2．PPARγ激動(dòng)劑吡格列酮可改善肥胖小鼠AdipoR1在足細(xì)胞上的表達(dá)，提高血清脂聯(lián)素水平，降低蛋白尿排泄，改善肥胖帶來(lái)的腎臟病理學(xué)異常。
　　3．相對(duì)于小劑量PPARγ激動(dòng)劑，大劑量PPARγ激動(dòng)劑更能在肥胖時(shí)對(duì)腎臟