PPARγ激動劑對肥胖小鼠足細胞AdipoR1的影響.pdf

1、目的：
　　當今世界肥胖已經(jīng)成為一種常見的疾病，而肥胖導致的各種并發(fā)癥也成為研究熱點。本文針對肥胖相關性腎?。╫besity-related glomerulopathy，ORG）進行了相關研究。旨在通過對單純肥胖小鼠在治療過程中血清ADP和足細胞AdipoR1的表達水平，24h尿液中微量白蛋白含量，小鼠腎臟病理等的觀察測定以及分析對比，探討不同劑量PPARγ激動劑對于ORG治療的影響，完善和補充PPARγ激動劑治療ORG的相關理

2、論。
　　方法：
　　6周齡雄性ob/ob小鼠24只和其同系C57BL/6J小鼠8只，適應性飼養(yǎng)2周。之后按照ob/ob小鼠的體質量進行隨機分層，將其分為3組：模型組（M組）、小劑量吡格列酮治療組（T1組）和大劑量吡格列酮治療組（T2組）；余下C57BL/6J小鼠作為肥胖小鼠研究參照對象（C組）。ob/ob小鼠和C57BL/6J都給予高脂飼料喂養(yǎng)。小鼠用藥通過灌胃進行，其中T1、T2組小鼠給予吡格列酮溶液，劑量分別為2.25

3、 mg·kg-1·d-1和6.65mg·kg-1·d-1，而其余小鼠則使用等體積蒸餾水，每天進行一次。開始用藥后依據(jù)小鼠體質量變化情況調整吡格列酮用藥劑量，每周進行一次，持續(xù)12周。灌胃前和實驗結束后采集小鼠血液標本以測量其血清ADP及血糖，并留尿測定24小時尿mALB。12周末用摘眼球法處死小鼠，摘取雙側腎臟，對小鼠腎臟進行觀察和測量，包括稱量右腎濕重；比較各組小鼠腎臟病理改變的程度（HE染色光鏡觀察），同時在光鏡下測量腎小球直徑；足

4、細胞上ZO-1的表達水平、WT-1標記的足細胞百分數(shù)及AdipoR1表達水平的測定（免疫組化方法測定）。比較以上測得的四組小鼠之間腎臟病理指標及血清、尿液指標之間的差異并對這些指標進行線性相關分析，相關數(shù)學分析使用17.0版SPSS軟件進行，判定當P<0.05時差異明顯，有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.小鼠體質量及血糖：6周齡時ob/ob小鼠（M、T1和T2組）平均體質量明顯高于C57BL/6J小鼠（P<0.01），適應

5、性飼養(yǎng)2周后，ob/ob小鼠（M、T1和T2組）平均體質量超過正常小鼠（C組）平均體質量的50％（＞20%），屬于肥胖小鼠[10]。測得所有小鼠的血糖值均未超過16.7mmol/L即小鼠糖尿病標準，在后續(xù)分析中除外糖尿病的影響因素。M組、T1組、T2組小鼠體質量之間無明顯差異（P>0.05）。實驗結束后測得 M組和T1、T2組小鼠體質量顯著大于C組（P<0.01），其中，T2組較T1組小鼠體質量升高更明顯（P<0.01）。各組小鼠實驗后

6、體質量均顯著高于實驗前（P<0.01）。
　　2.小鼠血清ADP：實驗前測得M組和T1、T2組小鼠較C組的血清ADP明顯降低（P<0.01），而M、 T1、T2三組小鼠之間無顯著差異（P>0.05）。實驗后T1、T2組小鼠高于M組小鼠（P<0.01），其中，T2組較T1組升高明顯（P<0.01）。實驗前后C組小鼠無明顯差異（P>0.05）。
　　3.小鼠24h尿mALB：實驗前M組和T1、T2組小鼠尿mALB均高于C組小鼠（

7、P<0.01），M組和T1、T2組小鼠尿mALB基本無差異（P>0.05）。實驗后T1、T2組小鼠尿mALB明顯低于M組小鼠（P<0.01），其中，T2組明顯低于T1組（P<0.01）。實驗前后C組小鼠尿mALB無明顯差異（P>0.05）。
　　4.腎臟組織病理改變：在光鏡下觀察各組小鼠腎臟，C組小鼠腎小球正常無病變。ob/ob小鼠腎小球鮑曼氏囊增寬，基底膜增厚，系膜細胞和系膜基質增生，基質堆積，系膜細胞，足突細胞，上皮細胞內有脂

8、類的沉積。腎小球體積增大，部分伴有局灶節(jié)段性腎小球硬化，部分足突融合，輕度腎小管萎縮和間質纖維化。其中M組病變最為嚴重，其次是T1組與T2組。
　　右腎濕重：M組小鼠高于C組（P<0.01），T1、T2組小鼠高于C組小鼠，而低于M組（P<0.01），其中，T2組濕重小于T1組（P<0.05）。
　　腎小球直徑：M組小鼠腎小球直徑大于C組小鼠（P<0.01），T1、T2組小鼠腎小球直徑明顯大于C組小鼠，同時小于M組小鼠（P<0

9、.01）。其中，T2組與T1組相比較小（P<0.05）。
　　5.免疫組化結果：M組小鼠ZO-1表達水平、足細胞百分數(shù)、AdipoR1表達水平均明顯低于C組小鼠（P<0.01），T1、T2組小鼠ZO-1表達水平、足細胞百分數(shù)、AdipoR1表達水平均明顯低于C組小鼠，同時也明顯高于M組小鼠（P<0.01），其中 T2組與T1組相比明顯升高（P<0.01）。
　　6.線性關系分析顯示：小鼠血清ADP和體質量、右腎濕重、尿mAL

10、B、腎小球直徑呈負相關（P<0.001），和ZO-1表達水平、WT-1標記的足細胞百分數(shù)、AdipoR1表達水平呈正相關（P<0.001）。小鼠尿 mALB和體質量、右腎濕重、腎小球直徑呈正相關（P<0.001），和ZO-1表達水平、WT-1標記的足細胞百分數(shù)、AdipoR1表達水平呈負相關（P<0.001）。小鼠 AdipoR1表達水平與 ZO-1表達水平和WT-1標記的足細胞百分數(shù)呈正相關（P<0.001），而與體質量、腎小球直徑、

11、右腎濕重呈負相關（P<0.001）。
　　結論：
　　1．肥胖時血清脂聯(lián)素水平的下降及足細胞AdipoR1的減少，使足突上Z0-1表達下降，足細胞數(shù)目減少及結構破壞，足突融合，引起腎臟損害。
　　2．PPARγ激動劑吡格列酮可改善肥胖小鼠AdipoR1在足細胞上的表達，提高血清脂聯(lián)素水平，降低蛋白尿排泄，改善肥胖帶來的腎臟病理學異常。
　　3．相對于小劑量PPARγ激動劑，大劑量PPARγ激動劑更能在肥胖時對腎臟