PPARγ激動劑調控腎小管上皮細胞極性建立和遷移的機制研究.pdf

1、目的:
　　 細胞極性是細胞基本特征，指細胞成分、細胞結構和細胞功能的不對稱性分布，參與生物體多種重要生理病理過程，如細胞增殖、非對稱分裂、細胞遷移等。腎小管上皮具備典型的上皮細胞極性特征，其細胞極性的調控參與了許多重要腎臟生理和病理過程，深入研究腎小管上皮細胞極性的調控機制以及相關的信號通路對于全面了解腎臟的正常組織形態(tài)發(fā)生，尋求控制腎囊腫性疾病腎囊腫和繼發(fā)纖維化的發(fā)生、發(fā)展都具有重要意義。本文主要探討過氧化物酶增值活化受體(

2、PPARγ)激動劑羅格列酮在腎小管上皮細胞頂?shù)锥藰O性建立和細胞遷移過程中的作用
　　 方法:
　　 采用羅格列酮干預，建立MDCK(II)細胞三維培養(yǎng)模型，通過免疫熒光染色技術對囊腔形成的類型和囊腔形成早期頂?shù)锥藰O性標志蛋白定位進行分析。
　　 在二維培養(yǎng)環(huán)境下利用鈣轉換模型，通過免疫熒光染色和測量穿膜電阻抗，研究羅格列酮對細胞頂端膜形成維持和緊密連接形成的影響。
　　 使用愈傷模型和免疫熒光染色技術，探

3、討羅格列酮對腎小管上皮細胞細胞遷移的作用。
　　 利用Western Blotting方法檢測羅格列酮對相關極性蛋白表達的影響。
　　 結果:
　　 我們發(fā)現(xiàn)，在三維培養(yǎng)MDCKII細胞7天后，羅格列酮組單囊腔的比例明顯下降（Rosiglitazone組18.74±6.26％，對照組66.20±7.69％，t=44.46，P=0.005），多囊腔的比例明顯升高（Rosiglitazone組67.98±8.09％，

4、對照組26.70±4.62％，t=6.046，P=0.0263）;但是極性蛋白Par3，apkc的定位沒有發(fā)生改變;同時在囊腔形成早期（2-5個細胞時），羅格列酮組頂端標志蛋白Ezrin和側基底膜標志蛋白E-cadherin發(fā)生異常定位。
　　 在二維培養(yǎng)條件下，通過鈣離子轉換實驗，羅格列酮組延緩了頂端膜的形成（CS0h:對照組VACs占總細胞的比例為34.11±4.23％，Rosiglitazone組為42.36±3.87％;

5、 CS3h:對照組VACs占總細胞的比例為11.28±1.41％，Rosiglitazone組為28.44±2.30％），并且減弱了頂端膜對頂端膜蛋白的維持作用（CS3h:對照組未發(fā)生頂端蛋白內陷的細胞占總細胞的比例為61.24±4.59％，Rosiglitazone組為12.38±2.69％，t=13.50，P=0.0054）;同時羅格列酮還延緩的緊密連接的形成，但并沒有阻礙最終形成;在蛋白水平上，發(fā)現(xiàn)下調極性蛋白Par3的表達。在愈

6、傷模型中，羅格列酮阻礙細胞遷移過程（對照組細胞的愈合率為37.63±2.50％，而Rosiglitazone干預組細胞的愈合率明顯低于對照組，僅為23.07±4.86％，t=4.524，P=0.0106）;羅格列酮影響極性蛋白Par3和Occludin在細胞遷移前緣的定位，并改變細胞骨架的形態(tài)，同時下調Occludin蛋白表達水平。
　　 結論:
　　 在三維培養(yǎng)模型中，羅格列酮通過干擾頂?shù)锥说鞍自谀夷[形成早期的轉運定位