骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制水通道蛋白4的上調(diào)減輕腦缺血誘發(fā)的腦水腫的分子機(jī)理研究.pdf

1、研究目的:腦缺血后,水通道蛋白4(AQP4)上調(diào)并且血腦屏障(BBB)通透性破壞,進(jìn)而引發(fā)腦水腫。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)被認(rèn)為能有效抑制炎癥反應(yīng),因而在治療缺血性卒中中應(yīng)用前景廣闊。但MSCs對(duì)血腦屏障通透性透性的影響現(xiàn)在仍不清楚。本研究中,我們檢測(cè)腦缺血后 MSCs治療是否對(duì)維持血腦屏障完整性有積極作用,并且進(jìn)一步探討了AQP4對(duì)血腦屏障完整性的作用及可能機(jī)制。
　　方法:成年雄性 CD1小鼠,采用線栓法行短暫性大腦中動(dòng)脈

2、梗塞(tMCAO)90分鐘,再灌注20分鐘內(nèi),立體定位注射MSCs于小鼠紋狀體區(qū)域。造模后1天,3天,進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分并檢測(cè)BBB通透性和腦水腫。然后,研究了凋亡的星形膠質(zhì)細(xì)胞,AQP4及炎癥因子(白介素-1?,白介素-6和腫瘤壞死因子-?)的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn),我們使用了LPS激活的小膠質(zhì)細(xì)胞的條件培養(yǎng)液刺激培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞并檢測(cè)AQP4的表達(dá)。另外,我們研究了AQP4干擾對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞在激活的小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液刺激下凋亡的影響。最后

3、,我們探討了絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路(p38, JNK和ERK1/2)和AQP4調(diào)節(jié)的關(guān)系。
　　結(jié)果:相比于對(duì)照組,MSCs治療組的小鼠神經(jīng)缺陷評(píng)分(mNSS),缺血誘發(fā)的腦水腫,免疫球蛋白 G和伊文斯藍(lán)的滲出都顯著下降(p<0.05)。同時(shí),MSCs治療明顯減少了緊密連接蛋白Occludin和ZO-1間的間隙形成(p<0.05)。另外,我們也發(fā)現(xiàn)MSCs能有效抑制缺血后 AQP4的上調(diào)并減少星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡(

4、p<0.05)。體外實(shí)驗(yàn)表明脂多糖(LPS)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液能有效地誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞中 AQP4的表達(dá)及p38,JNK的磷酸化及星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡(p<0.05)。MSCs處理減少了LPS激活的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的表達(dá),這進(jìn)一步使培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中 AQP4上調(diào)減弱及凋亡減少。同時(shí),AQP4干擾也能減少炎癥條件下星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡。p38和JNK的抑制劑實(shí)驗(yàn)證明是p38而不是JNK調(diào)控AQP4的表達(dá)(p<0.05)。