大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞缺血心肌移植的時效性研究.pdf

1、目的：觀察在大鼠心肌梗塞后不同時期進行骨髓間充質(zhì)干細胞缺血心肌移植，對大鼠的心功能和缺血心肌組織毛細血管新生作用的影響，以及移植細胞在宿主體內(nèi)存活、分化的情況，以探討心肌梗塞后細胞移植治療的最佳時間窗。 方法：將成年雄性近交系Wistar大鼠85只隨機分為假手術組(n=6)和建模組(n=79)。后者用結(jié)扎左冠狀動脈前降支的方法建立心肌梗塞模型。分別從心電圖、組織形態(tài)學、心功能(左室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,msx>、心

2、率)方面對建模組動物和假手術組動物進行比較，評估模型效果。隨后，將剩余的已成功建立心肌梗塞模型的54只大鼠隨機分成移植對照組(DMEM組，n=24)、細胞移植組(MSC組，n=24)、骨髓采集組(n=6)。無菌解剖骨髓采集組大鼠的股骨、脛骨和肱骨，常規(guī)抽取骨髓，分離骨髓間充質(zhì)干細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)擴增后制備細胞懸液。將已用熒光染料DAPI進行過細胞核標記的骨髓間充質(zhì)干細胞(O.15ml含1×10<'6>個細胞)分別于建模后1小時(MSC-1

3、組，n=8)、2周(MSC-2組，n=8)和4周(MSC-3組，n=8)，直接注射入細胞移植組動物梗死心肌組織邊緣區(qū)。移植對照組用同樣方法分別于建模后1小時(DMEM-1組，n=8)、2周(DMEM-2組，n=8)和4周(DMEM-3組，n=8)注射等量(O.15m1)培養(yǎng)液。所有MSC組和DMEM組動物于移植手術后4周處死，用免疫熒光法觀察移植細胞在體內(nèi)存活、分化情況，計算心梗邊緣區(qū)毛細血管密度，用RT-PCR．方法測定心梗邊緣區(qū)VE

4、GF的表達，用非循環(huán)式langendorff模型檢測左室血流動力學指標(左室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,max>)，評價心臟功能改善效果。 結(jié)果：用結(jié)扎左冠狀動脈前降支法建立心肌梗塞模型的大鼠與假手術組大鼠比較，心電圖表現(xiàn)出明顯的ST-T改變和病理性Q波；組織切片HE染色可見大量心肌細胞壞死，心梗后數(shù)小時表現(xiàn)為炎癥細胞浸潤為主，心梗后2周炎癥反應逐漸減弱，纖維組織開始增生，心梗后4周表現(xiàn)為疤痕形成為主；血流動力學指標(左

5、室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,max>、心率)均有顯著性下降。分離純化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)流式細胞學方法鑒定表面標志物為CD44+、CD29+、CD34-。MSC-1、2、3組均見移植細胞存活，并有部分移植細胞向心肌細胞發(fā)生分化，其中MSC-2組分化率顯著高于其它組。MSC-2、3N毛細血管密度，VEGF表達和左室血流動力學指標(左室收縮壓、左室發(fā)展壓)與DMEM-2、3組相比有顯著提高，而MSC-1組和DMEM-1組間比較

6、差異無統(tǒng)計學意義?！纃p／dt<,max>表現(xiàn)為MSC-1、2、3組均顯著高于DMEM-1、2、3N。MSC-1、2、3組比較，MSC-2組毛細血管密度，VEGF表達和左室血流動力學指標(左室收縮壓、左室發(fā)展壓、±dp／dt<,max>)顯著高于其他兩組。 結(jié)論：采用左冠狀靜脈定位，結(jié)扎左冠狀動脈前降支的方法能成功、穩(wěn)定的建立大鼠心肌梗塞模型。與心梗后1小時和4周比較，選擇大鼠心肌梗塞后2周進行骨髓間充質(zhì)干細胞移植，移植細胞向心