大鼠肺組織缺血再灌注損傷后HIF-1α與c-fos表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的: 通過(guò)建立肺缺血再灌注損傷（lung ischemic-reperfusion injury,LIRI）模型，觀察可溶性腫瘤壞死因子受體-Fc融合蛋白（soluble tumor necrosis receptor-Fc fusion protein,sTNFRI-Fc protein）對(duì)其對(duì)肺損傷的保護(hù)性作用效果，并觀察肺缺血再灌注中缺氧誘導(dǎo)因子-1α( hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)及c

2、-fos在大鼠肺缺血損傷中的作用機(jī)制，進(jìn)一步探討sTNFRI-Fc 保護(hù)作用的深層機(jī)制和原理。
　　 方法: 150只Wistar大鼠不拘雌雄隨機(jī)分為三組，每組50只，I/R組（行左肺缺血再灌注損傷），CN組（假手術(shù)只開(kāi)胸而不行左肺缺血再灌注損傷），TF組（行左肺缺血再灌注損傷后再靜脈給予可溶性TNFRI-Fc融合蛋白3μg/㎏），每組又分為0、1、2、4、8 h五個(gè)亞組。在呼吸機(jī)輔助下，開(kāi)胸后I/R及TF組大鼠左肺門阻斷行缺血

3、45分鐘，開(kāi)放左肺門再灌注作為缺血再灌注損傷模型。分別于缺血再灌注后0、1、2、4和8 h取材。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)摘取肺組織測(cè)肺組織濕/干重比值（W/D），制成組織勻漿測(cè)髓過(guò)氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛(MDA)含量。并留取肺組織采用組織病理學(xué)、組織芯片技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)與圖象分析技術(shù)，觀察肺組織病理學(xué)改變、HIF-1α及c-fos的表達(dá)及灰度值變化。
　　 結(jié)果: 經(jīng)過(guò)缺血再灌注后，各實(shí)驗(yàn)組的檢測(cè)指標(biāo)呈

4、現(xiàn)明顯差異：與I/R組相比，TF組的病理組織學(xué)光鏡下肺泡破壞減少，出血，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯改善；SOD系統(tǒng)在TF組得到保護(hù)，破壞減少，與I/R組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與CN組差異不明顯(p>0.05)；肺組織MPO及MDA在I/R組活力較余組明顯增強(qiáng)(P<0.01)，而CN組和TF組MPO活力相仿，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HIF-1α與c-fos的陽(yáng)性表達(dá)位于肺泡上皮細(xì)胞胞核或胞漿，其表達(dá)強(qiáng)度肺再灌注組高于肺缺血再灌注行

5、可溶性TNFRI-Fc融合蛋白處理組與對(duì)照組。隨缺血再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)HIF-1α及c-fos表達(dá)增強(qiáng)，于4h時(shí)達(dá)最高峰。肺缺血再灌注組的表達(dá)強(qiáng)度高于肺缺血再灌注行可溶性TNFRI-Fc融合蛋白處理組正常對(duì)照組(P<0.05)。缺血再灌注后肺組織細(xì)胞凋亡的變化：與對(duì)照組比較I/R組與TF組在各時(shí)相點(diǎn)表達(dá)均增強(qiáng)，主要分布在肺泡上皮細(xì)胞的胞核，但TF組在各時(shí)相點(diǎn)表達(dá)均弱于I/R組。
　　 結(jié)論: 在體動(dòng)物左肺阻斷/開(kāi)放是經(jīng)典的肺臟缺血

6、再灌注損傷模型，本實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)其具有明確的實(shí)驗(yàn)損傷效果；缺血再灌注時(shí)HIF-1α的應(yīng)激性升高對(duì)于其適應(yīng)缺血再灌注有重要意義，它在一定程度上直接影響細(xì)胞凋亡調(diào)控基因c-fos的變化。失代償?shù)慕Y(jié)果可能引起肺組織細(xì)胞凋亡異常增加，影響缺血再灌損傷時(shí)肺組織功能導(dǎo)致肺臟損傷?？扇苄訲NFRI-Fc融合蛋白對(duì)移植肺缺血再灌注損傷有顯著的保護(hù)作用，與其有效中和TNFα并阻斷其生物學(xué)活性有關(guān)。細(xì)胞凋亡與c-fos、HIF-1α表達(dá)強(qiáng)度的變化呈正相關(guān)(r分