PKD1基因對體外培養(yǎng)腫瘤細胞侵襲和轉移影響的分子機制研究.pdf

1、目的：常染色體多囊腎病(ADPKD)是最為常見和多發(fā)的遺傳性疾病，PKD1是主要的致病基因，占所有病人中的85％，其主要特征主要是在腎臟或肝臟的小管進行性擴張的囊腫。PKD1所編碼的蛋白PC-1功能廣泛，有研究證實PC-1參與了調節(jié)細胞的增殖、凋亡，鈣離子通道的調節(jié)，參與了G-蛋白偶連的受體通路，PC-1的IG-g結構域參與細胞與細胞以及細胞與基質之間的粘附，被認為可能是細胞與細胞/基質的粘附受體。此外，有推測PC-1是做為腫瘤抑制因子

2、蛋白家族中的一個新的成員。本實驗在前人工作的基礎上利用已經構建好的PKD1表達載體，通過人的肝癌、結腸癌、肺瘤細胞株為模型來研究PKD1基因的過表達對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞生物學行為主要是涉及細胞遷移的影響及其分子機理研究。 方法：分別以人的肝癌、結腸癌、肺瘤細胞株為模型，建立人的PKD1 cDNA轉基因穩(wěn)定表達細胞株，并將其分為4組。實驗組1，外源性人的PKDl轉基因組；對照組2，空載pcDNA3.1轉染組；對照組3，陰性對照組；

3、對照組4，特異性信號通路抑制子處理組。分別觀察過表達PDK1腫瘤細胞對細胞外基質的粘附情況，細胞間的粘附情況，以及腫瘤細胞的遷移情況和腫瘤對細胞外基質的的侵襲情況。Western blotting來探討其可能涉及的大概分子機制。 結果：①PKD1處理組：由于PKD1基因的過表達使腫瘤細胞對Ⅰ型膠原粘附增強，細胞數目比未處理組及空載對照組高出0.5％(P<0.05)。②細胞聚集實驗表明，PKD1處理組細胞比其它對照組的細胞聚集能力

4、增強，PKDl處理組聚集的細胞數量和細胞團塊的大小都比未處理的要多。③細胞遷移實驗顯示，PKD1處理組細胞遷移速度顯著燹慢，在相同的時間內，陰性對照細胞劃痕合攏，而PKD1處理組變化不大。④侵襲實驗表明，PKD1處理組細胞侵襲力明顯減弱，和其它對照組相比，侵入膠原的細胞數量減少大約3倍(P<0.01)。⑤Westernblotting檢測PKDl對體外培養(yǎng)腫瘤細胞粘附和侵襲力的影響作用可能部分通過Wnt信號通路。 結論：通過體外