多價血吸蟲蛋白疫苗的優(yōu)選與原核表達研究.pdf

1、血吸蟲病是一種世界性的傳染性疾病,它嚴重危害著人類的生命健康,阻礙社會發(fā)展,常規(guī)的預防和治療手段難以遏制形勢日益嚴峻的血吸蟲疫情,研制血吸蟲疫苗是預防血吸蟲病最有效的方法之一。目前血吸蟲蛋白疫苗和血吸蟲核酸疫苗是主要的兩種疫苗形式。血吸蟲核酸疫苗能夠為實驗動物提供一定的免疫保護力,然而其安全性在短時間內(nèi)還無法得到確認。與核酸疫苗相比,蛋白疫苗的技術(shù)較為成熟,且其安全性得到驗證,因此血吸蟲蛋白疫苗有可能首先實行產(chǎn)業(yè)化。血吸蟲蛋白疫苗有單價

2、蛋白疫苗和多價蛋白疫苗形式,生產(chǎn)多價蛋白疫苗可以減少生產(chǎn)成本和簡化生產(chǎn)工藝。然而,利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)多價蛋白疫苗時,是否因為蛋白融合之后片段過大而影響其合成是一個需要研究的問題。為此,本研究建立了血吸蟲蛋白疫苗原核表達系統(tǒng),對單價蛋白疫苗和多價蛋白疫苗的原核表達進行了深入的研究,取得了以下實驗結(jié)果:
　　(1)根據(jù)WHO提供的血吸蟲疫苗候選抗原以及利用生物信息學方法分析抗原的疏水性和高級結(jié)構(gòu),篩選出合適的血吸蟲抗原基因( Sj2

3、6, SjGAPDH, Sj26.GAPDH)來進行研究。
　　(2)克隆到了日本血吸蟲單價抗原基因Sj26和SjGAPDH以及融合抗原基因Sj26.GAPDH,利用分子生物學方法將抗原基因連接到原核表達載體上,構(gòu)建成原核表達系統(tǒng),經(jīng)酶切驗證和測序驗證,表明構(gòu)建成功。通過鎳離子層析柱的親和層析來對目的蛋白進行分離純化,并且摸索出鎳離子層析柱的最佳洗脫條件。
　　(3)利用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)對分離得到的單價日本血吸