還腦益聰方對注射Aβ1-42致AD大鼠模型細胞凋亡和炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種以獲得性慢性進行性記憶力減退、認知功能障礙以及行為異常為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。隨著人均壽命的普遍延長，AD的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。目前認為AD典型的病理學特征包括：大腦神經(jīng)細胞外大量老年斑(Senile plagues，SP)沉積，神經(jīng)元纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles，NTFs)和選擇性大腦皮層和海馬區(qū)神經(jīng)細胞大量損傷和丟失。β-淀粉樣

2、蛋白(Aβ)是構(gòu)成老年斑的核心成分，由β-淀粉樣前體蛋白(APP)降解而成，對神經(jīng)細胞有直接的毒性作用，可誘導神經(jīng)細胞凋亡，Aβ在大腦組織內(nèi)異常沉積是AD發(fā)病的起始因素和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本實驗通過大鼠腦組織海馬CA1區(qū)內(nèi)注射Aβ1-42制作實驗性AD模型，觀察大鼠行為學改變，探討導致AD大鼠模型細胞凋亡途徑和炎癥因子的作用，觀察中藥復方還腦益聰方對Aβ1-42致AD模型的干預(yù)作用及機制，為臨床治療AD提供藥理依據(jù)。
　　目的：
　

3、　觀察中藥復方還腦益聰方對大鼠海馬CA1區(qū)注射Aβ1-42造成AD模型細胞凋亡相關(guān)蛋白表達及炎癥反應(yīng)的影響，探討還腦益聰方治療AD的作用機理。
　　方法：
　　采用雙側(cè)海馬內(nèi)一次性注射β-淀粉樣多肽1-42片段(Aβ1-42)(10ug)制作大鼠AD模型。以膽堿酯酶抑制劑鹽酸多奈哌齊為對照藥。病理驗證成功后，所有造模大鼠隨機分為模型組、西藥組、還腦益聰方小劑量組、還腦益聰方中劑量組和還腦益聰方大劑量組共五組，另設(shè)假手術(shù)組，注

4、射等量的生理鹽水，每組均為12只。連續(xù)灌胃12周，進行相關(guān)指標檢測。實驗分為三部分。一，采用Morris水迷宮檢測AD大鼠模型的學習記憶能力，觀察還腦益聰方對注射Aβ1-42致AD模型大鼠行為學的影響及海馬區(qū)神經(jīng)細胞病理形態(tài)的變化。二，檢測AD模型大鼠血清及腦組織海馬和皮層的炎癥介質(zhì)IL-1、TNF-a的水平和含量；采用免疫組化法檢測AD大鼠模型海馬組織中Aβ蛋白的表達。三，采用免疫組化法觀察AD模型大鼠腦組織細胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2

5、、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12的表達。
　　結(jié)果：
　　一、還腦益聰方對注射Aβ1-42致AD大鼠模型行為學的影響。
　　與假手術(shù)組比較，模型組在外環(huán)區(qū)域游泳的距離占總距離的百分比明顯增加，中環(huán)和中心明顯減少(P<0.05或P<0.01)；第一次穿越原平臺時間延長(P<0.01)。與模型組比較，西藥組及還腦益聰方各劑量組在中環(huán)及中心區(qū)域明顯增加(P<0.05或

6、P<0.01)；第一次穿越原平臺的時間明顯縮短(P<0.05或P<0.01)；還腦益聰方中劑量組較模型組時間縮短，但無顯著性差別(P>0.05)。
　　二、還腦益聰方對注射Aβ1-42致AD大鼠模型腦組織和血清炎癥介質(zhì)及Aβ含量的影響。
　　與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清IL-1、TNF-α的水平顯著升高(P<0.05或P<0.01)；海馬組織中IL-1、TNF-α及Aβ含量明顯升高(P<0.01)。藥物治療12周后，與模型

7、組比較，西藥組和還腦益聰方各劑量組血清IL-1、TNF-α的水平顯著降低，有顯著性差異(P<0.01)；西藥組、還腦益聰方大劑量組海馬IL-1、TNF-α的含量明顯降低，有顯著性差異(P<0.01)；還腦益聰方中劑量組海馬TNF-α的含量顯著降低(P<0.01)、IL-1的含量較模型組減少，但無顯著性差異(P>0.05)；Aβ含量明顯降低，有顯著性差異(P<0.01)。
　　三、還腦益聰方對注射Aβ1-42致AD大鼠模型細胞凋亡通

8、路相關(guān)蛋白表達及調(diào)控的影響。
　　與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡相關(guān)調(diào)控蛋白Bcl-2/Bax比值明顯降低(P<0.01)；細胞凋亡通路相關(guān)蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12的表達明顯上調(diào)(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，西藥組、還腦益聰方中劑量組、還腦益聰方大劑量組Bcl-2/Bax比值明顯升高，有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)、還腦益聰方小劑量

9、組無顯著性差異(P>0.05)；西藥組、還腦益聰方大劑量組Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12的表達顯著下調(diào)，有顯著性差異(P<0.01)、還腦益聰方中劑量組Caspase-8表達明顯下調(diào)(P<0.01)，還腦益聰方小劑量和中劑量組Caspase-12表達顯著降低(P<0.05或P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　還腦益聰方能明顯改善注射Aβ1-42致AD模型大鼠空間識別和學習記憶的